詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
產(chǎn)品名稱:兔胰島β細(xì)胞
組織來源:胰腺
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形,、多角形
傳代特性:不建議傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
兔胰島β體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞簡介:
兔胰島β分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分,。外分泌腺由腺泡和腺管組成,,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道,。胰液中含有,、原,、脂肪酶。胰液通過胰腺管排入十二指腸,,有消化蛋白質(zhì),、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成,,胰島主要由4種細(xì)胞組成:α細(xì)胞,、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞,。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,,升高血糖;β細(xì)胞分泌胰島素,,降低血糖,;γ細(xì)胞分泌,以旁分泌的方式抑制α,、β細(xì)胞的分泌,;PP細(xì)胞分泌胰多肽,抑制胃腸運(yùn)動,、胰液分泌和膽囊收縮,。胰島β細(xì)胞,即胰島B細(xì)胞,,是胰島細(xì)胞的一種,,屬內(nèi)分泌細(xì)胞的一種,能分泌胰島素,,與胰島α細(xì)胞分泌的胰高血糖素一起起到調(diào)節(jié)血糖的作用,。胰島B細(xì)胞功能受損、胰島素分泌絕對或相對不足(胰島素抵抗),,會使血糖升高,從而引發(fā)糖尿病,。而胰島B細(xì)胞癌變會生成胰島素瘤,,引起惡性血糖降低癥狀。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔胰島β采用先用膠原酶消化分離得到胰島,、再用逐級消化胰島制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔胰島β經(jīng)Insulin含量檢測,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一,、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),,培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二,、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
a),、對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,,脫落后吸出,,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b),、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
收到細(xì)胞如何處理?
1,、首先,,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有,請拍照,,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
4,、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢,、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5,、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,,可正常傳代;若未超過80%,,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松,。
6、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時,若細(xì)胞密度超過80%,,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),,補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),,直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作
公司正在出售的產(chǎn)品:
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SELP Pro僀?僀
CD19(B-lymphocyte antigen CD19 0.5mgCD19(B-lymphocyte antigen CD19) CD19
CDK7 & CCNH & MNAT1 Protein Human 重組人 CDK7 & CCNH & MNAT1 Heterotrimer 蛋白
TNFRSF19重組小鼠 TNFRSF19 / TROY 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
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TXNDC17重組人 TXNDC17 / TRP14 / TXNL5 蛋白 Protein
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