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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
產(chǎn)品名稱：兔直腸平滑肌細(xì)胞
組織來源：直腸
產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔直腸平滑肌體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞簡介：
兔直腸平滑肌分離自直腸組織,；直腸為大腸的未段，位于小骨盆內(nèi),。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結(jié)腸,，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿過盆膈,，下端以門而終,。直腸上端的大小似結(jié)腸，其下端擴(kuò)大成直腸壺腹,，是糞便排出前的暫存部位,，下端變細(xì)接管。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關(guān)系密切,，與骶椎有相同的曲度,。直腸周圍多脂肪、無縱帶,，位于膀胱和生殖器官的背側(cè),。直腸平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn),。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈,，來自髂內(nèi)動脈的直腸中動脈和來自髂內(nèi)動脈的直腸下動脈。平滑肌收縮是胃腸蠕動中基本的運(yùn)動方式,；腸炎時(shí)由于平滑肌特殊肌動蛋白的增加導(dǎo)致了平滑肌層的增厚,。平滑肌肌動蛋白可能影響收縮力的產(chǎn)生，這進(jìn)一步證明了炎癥時(shí)的腸平滑肌細(xì)胞具有可塑性,。利用腸平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng),，可以幫助了解收縮、增殖和胃腸道結(jié)締組織對平滑肌細(xì)胞的反應(yīng),。
方法簡介：
實(shí)驗(yàn)室分離的兔直腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
實(shí)驗(yàn)室分離的兔直腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟：
一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）,、對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細(xì)胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b）、對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
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收到細(xì)胞如何處理,？
1,、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,，請拍照,，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
4,、靜置完成后,，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5,、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松,。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時(shí),，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%,，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作
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