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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
產(chǎn)品名稱:兔三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞
組織來源:腦
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):梭形,、多角形
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
兔三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞簡介:
兔三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)分離自三叉神經(jīng)組織,;三叉神經(jīng)為粗大的混合性腦神經(jīng),含一般軀體感覺和特殊內(nèi)臟運動兩種纖維,。其特殊內(nèi)臟運動纖維起于腦橋中段的三叉神經(jīng)運動核,,纖維組成三叉神經(jīng)運動根,,由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦,,位于感覺根下內(nèi)側(cè),后進入三叉神經(jīng)第3支下頜神經(jīng)中,,經(jīng)卵圓孔出顱,,隨下頜神經(jīng)分支分布于咀嚼肌等。運動根內(nèi)還含有三叉神經(jīng)中腦核有關(guān)的纖維,,主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺,。三叉神經(jīng)內(nèi)以軀體感覺神經(jīng)纖維為主,這些纖維的細胞體位于三叉神經(jīng)節(jié)(半月節(jié))內(nèi),,該神經(jīng)節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉神經(jīng)壓跡處,,為硬腦膜形成的美克爾腔包裹。神經(jīng)膠質(zhì)細胞是神經(jīng)組織中除神經(jīng)元以外的另一大類細胞,,也有突起,,但無樹突和軸突之分,廣泛分布于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng),。在哺乳類動物中,,神經(jīng)膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元的細胞數(shù)量比例約為10:1。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的神經(jīng)膠質(zhì)細胞主要有星形膠質(zhì)細胞,、少突膠質(zhì)細胞(與前者合稱為大膠質(zhì)細胞)和小膠質(zhì)細胞等,。傳統(tǒng)認(rèn)為膠質(zhì)細胞屬于結(jié)締組織,其作用僅是連接和支持各種神經(jīng)成分,,其實神經(jīng)膠質(zhì)還起著分配營養(yǎng)物質(zhì),、參與修復(fù)和吞噬的作用,在形態(tài),、化學(xué)特征和胚胎起源上都不同于普通結(jié)締組織,。星形膠質(zhì)前體細胞主要表達Vimentin,而成熟之后表達Vimentin和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP),,故GFAP被認(rèn)為是星形膠質(zhì)細胞成熟的標(biāo)志物,。
方法簡介:
實驗室分離的兔三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)采用消化法結(jié)合差速貼壁法篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔三叉神經(jīng)星形膠質(zhì)經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一、復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
a)、對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細胞,,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b)、對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
收到細胞如何處理,?
1,、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有,,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3,、仔細閱讀細胞說明書,,了解細胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。
4、靜置完成后,,取出細胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢、拍照,,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。
5,、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代,;若未超過80%,,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松。
6,、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,,若細胞密度超過80%,,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml,;若細胞密度未超過80%,,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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