免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù),，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種，抗原抗體反應(yīng)的原理,，先將已知的抗原或抗體上標(biāo)記熒光基因,，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細(xì)胞或者組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位基本流程

1.細(xì)胞準(zhǔn)備,。對單層生長細(xì)胞，在傳代培養(yǎng)時,將細(xì)胞接種到預(yù)先放置有處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中,，待
細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片,，PBS洗兩次;對懸浮生長細(xì)胞，取對數(shù)生長細(xì)胞,，PBS離心洗滌
(1000rpm,5min) 2次,，用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片
2.定。根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌┕潭?xì)胞,。定完畢后的細(xì)胞可置于含疊氮納的PBS中4°C保存3個
月。PBS洗滌3x5 min
3.通透,。使用交聯(lián)劑(如多聚甲醛)固定后的細(xì)胞,，一般需要 在加入抗體孵育前，對細(xì)胞進(jìn)行通透處理,
以保證抗體能夠到達(dá)抗原部位,。選擇通透劑應(yīng)充分考慮抗原蛋白的性質(zhì),。通透的時間一般在5-15min.通透
后用PBS洗滌3x5 min
4.封閉。使用封閉液對細(xì)胞進(jìn)行封閉,，時間一般為30min
5.一抗結(jié)合,。室溫孵育1h或者4°C過夜。 PBST漂洗3次,， 每次沖洗5min
6.二抗結(jié)合,。間接兔疫熒光需要使用二抗。室溫避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次沖洗5min后,，用蒸餾
水漂洗-次
7.封片及檢測,。滴加封片劑- -滴， 封片,，熒光顯微鏡檢查