研究人員發(fā)現(xiàn)肺癌中IL6的N-糖基化缺陷會誘導癌細胞轉移和對表皮生長因子酪an酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）產(chǎn)生耐藥性,，揭示了其潛在機制,，為

肺癌治療提供了新的理論依據(jù)和潛在靶點。

研究背景：

肺癌是全球癌癥相關死亡的主要原因之一,，表皮生長因子受體酪an酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）是攜帶敏感EGFR突變的肺腺癌患者的標準治療方法,，

但大多數(shù)患者會產(chǎn)生獲得性耐藥,。IL6與受體結合后可激活多種信號通路,，在肺癌進展和耐藥中起重要作用,，但IL6的糖基化修飾對其功能的影響尚不

清楚。

研究模式圖：

在非小細胞肺癌（NSCLC）細胞中,，在未接受EGFR TKI治療的環(huán)境下,，自分泌的IL6（NG-IL6）主要在N73位點發(fā)生N-糖基化修飾，在T170位點發(fā)

生O-糖基化修飾,。NG-IL6主要激活經(jīng)典的JAK-STAT3軸,，促進細胞增殖。然而，長期使用EGFR TKI治療會導致IL6分泌增加,，同時抑制N-糖基轉移

酶復合物成分（主要是STT3A或STT3B,、RPN1/2、DAD1和 DDOST）的表達,。這種抑制作用使得NG-IL6在N73位點的N-糖基化減少,，進而導致NG-IL6

在N73位點的N -糖基化進一步降低。結果是,，獲得耐藥性后，NG-IL6的比例下降,，而N-糖基化缺陷型IL6（deNG-IL6）的比例增加,。反過來，deNG-IL6

將信號偏好從JAK-STAT3軸轉移到SRC-YAP-SOX2軸,。這種替代激活的SRC-YAP-SOX2信號促進細胞可塑

性,，并導致耐藥性的產(chǎn)生。

圖1.長期EGFR TKI治療誘導deNG-IL6驅(qū)動腫瘤耐藥,。

研究方法:

細胞系與動物模型 ：使用多種肺癌細胞系和正常支氣管上皮細胞系,，建立了Osimertinib耐藥細胞系和小鼠移植瘤模型。

樣本采集：收集肺癌患者的惡性胸腔積液（MPE）和配對的肺癌組織,，包括未接受TKI治療和TKI耐藥患者的樣本,。

實驗技術：采用Western blotting、ELISA,、基因集富集分析（GSEA）,、免疫沉淀、質(zhì)譜分析,、細胞遷移和侵襲實驗,、動物體內(nèi)轉移實驗等多種技術

手段。

主要研究結果：

1. IL-6的N-糖基化修飾

圖2  肺癌細胞中IL-6的N-糖基化修飾

從肺癌患者惡性胸腔積液（MPE）中分離的肺腺癌細胞和多種肺癌細胞系分泌的 IL6 存在兩種形式（H-IL6和L-IL6,，重鏈/輕鏈）,，且H/L比值于

不同細胞系間存在差異。GSEA分析發(fā)現(xiàn)與N-糖基化過程相關的基因在癌癥組織中富集,。抑制劑處理和酶切實驗等證實H-IL6的形成依賴于

N-糖基化修飾,。

2.  N-糖基化IL6促進酪an酸磷酸化STAT3的核滯留而deNG-IL6誘導EMT的基因特征

圖3 N-糖基化IL6促進酪an酸磷酸化STAT3的核滯留

研究者預測了兩個潛在的N-糖位點（N73和N172）和四個可能的O-糖位點（T166，T171,，T170和S174）存在于hIL 6中,。MS結果表明聚糖鏈位于

N73、N172和T170,，結合通過WB結果分析確定了IL6聚糖鏈的主要附著位點是N73 + T170,，而非N172 + T170。

構建野生型和突變型IL6質(zhì)粒轉染細胞，發(fā)現(xiàn)N73Q-IL6缺失H-IL6條帶,，表明N73位點的糖基化對IL6功能有重要影響,。構建野生型和突變型IL6

質(zhì)粒轉染細胞，發(fā)現(xiàn)N73Q-IL6缺失H-IL6條帶,，表明N73位點的糖基化對IL6 功能有重要影響,。與N73Q-IL6相比，NG-IL6可促進STAT3的酪an酸

磷酸化和核滯留,，延長STAT3激活時間,；而N73Q-IL6則誘導 STAT3激活時間縮短，并改變下游信號偏好,，激活SRC-YAP-SOX2軸,；此外，N73Q

-IL6可誘導上皮-間質(zhì)轉化（EMT）相關基因表達,，促進肺癌細胞的遷移和侵襲能力,，在體內(nèi)可增強肺癌細胞的轉移能力，且這些作用可被針對

SRC,、YAP 和SOX2的抑制劑或shRNAs抑制,；

圖4 deNG-IL6誘導非小細胞肺癌的EMT、遷移和轉移

此外,，EGFR-TKI處理可誘導deNG-IL6的增加,，IL6糖基化狀態(tài)的這種變化可以將GP130受體的下游信號傳導從JAK-STAT 3切換到SRC-YAP-SOX2。

同時,，具有高水平deNG-IL6的肺癌細胞傾向于具有EMT相關特性,，可轉移到其他器官，

并表現(xiàn)出對EGFR-TKI的抗性,。

圖5 deNG-IL6將GP130信號偏好從JAK-STAT3切換到SRC-YAP軸

圖6 SOX2參與deNG-IL6誘導SRC-YAP軸驅(qū)動的腫瘤細胞遷移和轉移

3. Osimertinib誘導deNG-IL6的表達及SRC-YAP-OX2軸的激活

長期使用EGFR-TKI Osimertinib治療可誘導NG-IL6表達減少和deNG-IL6升高,，從而導致肺癌細胞對EGFR-TKI產(chǎn)生耐藥性。

圖7 Osimertinib誘導deNG-IL6的表達和隨后SRC-YAP-OX2軸的激活

阻斷IL6的受體GP130和GP80后,，各種細胞系中由WT-IL6和N73 Q-IL6所誘導的STAT 3活性降低,，而SRC-YAP軸信號的激活增加，這些數(shù)據(jù)表明 OR

細胞分泌的deNG-IL6不僅維持細胞存活,，也有利于細胞遷移,。

4. EGFR-TKI耐藥的NSCLC患者表現(xiàn)出高deNG-IL6表達和從JAK-STAT3到SRC-YAP的軸信號移位

為了證明deNG-IL6在NSCLC患者中的存在，研究從對EGFR TKIs具有na?ve（治療前）或耐藥（發(fā)生耐藥后）的患者的MPE中分離出MPECs,，

na?ve MPECs分泌H-IL6 多于 L-IL6,，而在EGFR TKIs耐藥MPECs中則相反。同時,，RNA測序的富集結果表明,，N-糖基化過程在OSTu中增強

而在ORTu中減弱,。

圖9 EGFR-TKI耐藥的NSCLC患者表現(xiàn)出高deNG-IL6表達和從JAK-STAT3到SRC-YAP的軸信號移位

EGFR-TKI 耐藥患者的MPECs中deNG-IL6比例增加，且腫瘤組織中STAT3信號減弱,，SRC信號增強,，進一步證明了deNG-IL6與耐藥和轉移的相關

性臨床樣本分析顯示，EGFR-TKI 耐藥患者的MPECs中deNG-IL6比例增加,，且腫瘤組織中STAT3信號減弱,，SRC信號增強，

進一步證明了deNG-IL6與耐藥和轉移的相關性,。

研究結論：

1. 在NSCLC中,，IL6主要在N73位點發(fā)生N-糖基化修飾，該修飾影響其下游信號通路的激活,，N-糖基化缺陷的IL6可誘導EMT,、遷移、轉移和耐藥,。

2. EGFR-TKI治療可降低肺癌細胞中N-糖基化相關酶的表達，導致IL6的N-糖基化減少,，進而激活SRC-YAP-SOX2軸,，促進癌細胞的可塑性和耐藥性。

3. 監(jiān)測IL6的糖基化狀態(tài)可能有助于預測肺癌的進展和EGFR-TKI耐藥性,，為肺癌的治療提供新的潛在靶點和生物標志物,。