產(chǎn)品信息 

生化試劑-CD4細(xì)胞分選磁珠 可用于對(duì)細(xì)胞進(jìn)行磁性標(biāo)記。標(biāo)記后,，將細(xì)胞懸液加載到分選柱上,，該柱放置在含分選器的磁場(chǎng)中。 磁性標(biāo)記的CD4+細(xì)胞被保留在柱內(nèi),。未標(biāo)記的細(xì)胞貫穿其中而被去除,。將分選柱從磁場(chǎng)中移除之后，洗脫磁性標(biāo)記的CD4+細(xì)胞作為陽(yáng)性選擇的細(xì)胞,。

 · 高磁珠結(jié)合力 

·  簡(jiǎn)便,、快捷

 ·  高純度、高得率、高活率

使用方法

試劑和儀器要求

1.緩沖液: （pH7.2 PBS,、0.5% BSA,、2 mM EDTA，2-8C),。

2.分選柱和分選器

3.(可選)用于流式細(xì)胞術(shù)分析的熒光偶聯(lián)CD4抗體,。

4.(可選)PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式細(xì)胞術(shù)排除死亡細(xì)胞。

5.(可選)預(yù)分離過(guò)濾器用于去除細(xì)胞團(tuán)塊,。

操作步驟

一,、樣本準(zhǔn)備

當(dāng)處理抗凝的外周血液時(shí)，應(yīng)通過(guò)密度梯度離心法分離外周血單核細(xì)胞(PBMC),。

在處理組織時(shí),，用標(biāo)準(zhǔn)的制備方法制備單細(xì)胞懸浮液。

二,、磁珠標(biāo)記

1.細(xì)胞計(jì)數(shù),。

2.300g 離心10min，去除上清,。

3.每 10?細(xì)胞,，用80μL緩沖液重懸。

4.每 10?細(xì)胞,，用20μLCD4磁珠混勻,。

5.(2-8)℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育時(shí)間;如果是常溫孵育,，會(huì)增加非特異結(jié)合),。

6.(可選)加入染色抗體，在2-8℃避光孵育5分鐘,。

7.每10?細(xì)胞,，加入1-2mL緩沖液洗滌，300g離心10min,，棄上清,。

8.用 500μL 緩沖液重懸細(xì)胞。

三,、磁性分選

1.將分選柱放置在分選器的磁場(chǎng)中,。

2.將分選柱中加入適量緩沖液，充分濕潤(rùn)分選柱（xM: 500μL,；xL: 3 mL）

3.將細(xì)胞懸液加到分選柱中,。

4.結(jié)合磁珠的細(xì)胞會(huì)被吸附到分選柱上，沒(méi)有結(jié)合的細(xì)胞會(huì)順著液體流下來(lái),。加適量的緩沖液,，待液體全部流盡,，再加入適量緩沖液，一共洗3次,。收集總流出物,。這是未標(biāo)記的細(xì)胞。（xM: 3X500μL,；xL: 3x3mL）

5.將分選柱從分選器中取出,，并將其放在合適的收集管上。

6.加適量的緩沖液到分選柱中,，迅速用塞子推下,，得到就是目的細(xì)胞。（xM: 1mL,；xL: 5 mL）

7.(可選)為了提高標(biāo)記細(xì)胞的純度,，洗脫部分可以在第二個(gè)xM或xL柱上富集。使用新的分選柱重復(fù)步驟1至6中描述的磁選過(guò)程,。

保存方法

在2-8℃條件下避光保存,，請(qǐng)勿冷凍。有效期見(jiàn)試劑外標(biāo)簽,。

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