產(chǎn)品名稱：鴨胚肝間質(zhì)細(xì)胞永生化（種屬鑒定）

規(guī)格： 5*10 5   

細(xì)胞詳述

胎肝是胚胎發(fā)育中晚期的主要造血器官,，具有特殊的生物學(xué)活性,。研究表明胎肝間質(zhì)細(xì)胞與骨髓間質(zhì)細(xì)胞一樣具有多向分化能力，而且能改善小鼠腎衰模型和糖尿病模型的癥狀,。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因,。

注意事項(xiàng)：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基,，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞,。

細(xì)胞特性

1) 細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常胚胎肝組織。

2) 細(xì)胞鑒定：CD44免疫熒光染色為陽(yáng)性,。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。

4) 不含有 HIV-1、 HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌,。

5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭狀細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng),。

產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行,。

1) 1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿wan全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸,；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多,，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁,。

產(chǎn)品使用

1) 本產(chǎn)品僅能用于科研

2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動(dòng)物和人的審核

3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核

鴨胚肝間質(zhì)細(xì)胞永生化相關(guān)細(xì)胞列表

01 什么是細(xì)胞永生化？

   正常組織來源的細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下可分裂生長(zhǎng),，但經(jīng)過有限次數(shù)的傳代后,，就會(huì)停止增殖，發(fā)生衰老和死亡,，這種現(xiàn)象稱之為海夫利克極限,。有的細(xì)胞自發(fā)或受外界因素的影響，可以從增殖衰老危機(jī)中逃離，從而擁有無限增殖的能力,，該過程稱之為細(xì)胞永生化（cell immortalization）,。

   細(xì)胞永生化是癌變的必經(jīng)途徑。

02 細(xì)胞永生化的方法,？

   細(xì)胞自發(fā)永生化的幾率非常小,，于人類細(xì)胞就更為罕見。

   人為干涉讓細(xì)胞永生化的方法包括：放射處理,、端粒酶激活,、病毒基因轉(zhuǎn)染、原癌基因激活,、抑癌基因抑制等,。其中，聽過慢病毒感染使細(xì)胞過表達(dá)猴腎病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶hTERT基因,，是常用的兩種細(xì)胞永生化的方法,。

01端粒酶激活

   端粒酶是一種能延長(zhǎng)端粒末端的核糖核蛋白酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成,。端粒酶能以自身的RNA為模板,，從端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA,， 以補(bǔ)償細(xì)胞分裂時(shí)染色體末端的縮短,，從而維持端粒的長(zhǎng)度，使細(xì)胞不會(huì)因端粒耗盡而出現(xiàn)凋亡,。

   正常情況下,，大多數(shù)體細(xì)胞端粒酶的表達(dá)是嚴(yán)格調(diào)控的，表達(dá)是瞬時(shí)和低水平的,。在原代培養(yǎng)的細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)人端粒酶催化亞基(hTERT)基因能穩(wěn)定端粒的長(zhǎng)度,，使細(xì)胞易于永生化，因此hTERT的激活是細(xì)胞永生化的重要步驟,。

   雖然激活端粒酶活性能夠使多種人和動(dòng)物的細(xì)胞永生化,，但是對(duì)于有些細(xì)胞，重建端粒酶活性并不足以使細(xì)胞永生化,，還需要借助癌基因法,。

02癌基因法

   一些原癌基因，如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2,，通過基因轉(zhuǎn)染可介導(dǎo)目的細(xì)胞永生化,。c-Myc是最早被發(fā)現(xiàn)的原癌基因，有許多與瘤化相關(guān)的功能區(qū)域,，其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的蛋白通過核膜進(jìn)入細(xì)胞核與端粒酶的啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合,，誘導(dǎo)端粒酶mRNA快速表達(dá),，直接激活端粒酶活性，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入永生化,。

   細(xì)胞永生化過程中,，抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等，通過等位基因隱性作用,、抑癌基因的顯性負(fù)作用等逐漸失去活性,，細(xì)胞老化途徑受阻。實(shí)驗(yàn)證明端粒酶的活性與抑癌基因表達(dá)產(chǎn)物的下調(diào)有相關(guān)關(guān)系,，推測(cè)抑癌基因的失活協(xié)同端粒酶的激活共同參與細(xì)胞永生化進(jìn)程,。

03病毒基因轉(zhuǎn)染

很多病毒感染能夠誘導(dǎo)細(xì)胞永生化，例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV),、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV),。這些病毒感染其天然宿主細(xì)胞，能誘導(dǎo)細(xì)胞永生化,。

   EBV能使B淋巴母細(xì)胞永生化形成淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系,，它是通過潛伏蛋白激活細(xì)胞因子與其受體相互作用的途徑使細(xì)胞永生的。EBV永生化B細(xì)胞的一個(gè)顯著的特點(diǎn)是端粒酶活性的提高,，這可能是導(dǎo)致B細(xì)胞永生的主要原因,。目前，EB病毒介導(dǎo)的細(xì)胞永生化應(yīng)用最多的是B淋巴細(xì)胞,，其他細(xì)胞中的應(yīng)用很少,。

   SV40是簡(jiǎn)單的真核細(xì)胞病毒，SV40的T抗原片段是常用的目的片段,，將其整合入靶細(xì)胞核內(nèi)并表達(dá),，可導(dǎo)致細(xì)胞增殖活力的改變并表現(xiàn)出多種與腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)化顯型,。應(yīng)用的方法包括：野生型SV40病毒共培養(yǎng)感染靶細(xì)胞,、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法等,。

   HPV已成功將人的包皮細(xì)胞,、角化上皮以及乳腺、胰導(dǎo)管和口腔等的上皮細(xì)胞永生化,。HPV病毒的早期表達(dá)蛋白E6和E7在細(xì)胞永生化中起決定性作用,。E6和E7蛋白能夠改變細(xì)胞的終末分化，誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入S期,，使細(xì)胞繞過正常細(xì)胞的周期檢查點(diǎn),。