大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞

細(xì)胞詳述

膽管,，輸送膽汁的管道。由肝分泌的膽汁,，經(jīng)肝左、右管,、肝總管,、膽囊管進(jìn)入膽囊貯存，肝內(nèi)膽管的部分包括：左,、右肝管,；左內(nèi)葉、左外葉,、右前葉,、右后葉膽管,；各肝段膽管；小葉間膽管,；毛細(xì)膽管,。

常見的膽管病變?nèi)缒懙篱]塞、原發(fā)性硬化性膽管炎,、膽管癌等,，都是以膽管上皮為病變靶位，因此研究膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特性和病理變化有重要意義,。在這些病變過程中,，肝內(nèi)膽管上皮常暴露于常暴露于較高炎癥因子中，會表現(xiàn)細(xì)胞損傷和繼發(fā)性增值為特征的病理變化,。

細(xì)胞特性

1） 細(xì)胞來源于實驗動物正常肝臟組織,。

2） 細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白19（CK-19）免疫熒光染色為陽性。

3） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%,。

4） 不含有 HIV-1,、 HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌,。

5）細(xì)胞生長方式：上皮樣,，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng),。

產(chǎn)品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠(yuǎn)近,，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1) 1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸,；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月,。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿wan全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁,。

產(chǎn)品使用

1) 本產(chǎn)品僅能用于科研

2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核

3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核

大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞列表

人舌鱗癌細(xì)胞 CAL-27

人肺癌細(xì)胞 Calu-1

人肺腺癌細(xì)胞 Calu-3

人退行性癌細(xì)胞 calu-6

人卵巢腺癌細(xì)胞 CAOV-3

人胰腺癌細(xì)胞 Capan-1

人胰腺癌細(xì)胞 Capan-2

人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞 caki-1

人腎透明細(xì)胞癌 CAKI-2

人宮頸癌細(xì)胞 CaSKi

人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞(有限細(xì)胞系） CCD841 CON

人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 CCRF-CEM

人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 CEM/C1

人卵巢癌細(xì)胞 CoC1

人結(jié)腸癌細(xì)胞 COLO205

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320 DM

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320 HSR

人結(jié)腸癌細(xì)胞 CW-2

結(jié)腸癌細(xì)胞 cx-1

人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D283 Med

人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D341 Med

人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 DAMI

人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 DAOY

人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 DAUDI

人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 DB

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 DLD-1

人肺癌細(xì)胞 DMS 53

人前列腺癌細(xì)胞 DU145

人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞 EA.hy926

人食管癌細(xì)胞 Eca-109

人膀胱癌細(xì)胞 ECV-304

人膀胱癌細(xì)胞 EJ-1[EJ1]

人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞 ES-2

人腺癌細(xì)胞系 F56

人咽鱗癌細(xì)胞 FADu

人甲狀腺癌細(xì)胞 FTC-133

人膽囊癌細(xì)胞 GBC-SD

人膽囊癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 GBC-SD+LUC

人胃黏膜上皮細(xì)胞 GES-1

人肝癌細(xì)胞亞型（過表達(dá)谷氨酰氨合成酶） GS-HEPG2

人T淋巴瘤白血病細(xì)胞 H9/HTLV-IIIB

人胚胎干細(xì)胞H9 h9 Feeder Frec

人胚胎干細(xì)胞H1 h1

人永生化表皮細(xì)胞 hacat

人永生化表皮細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HACAT+LUC

人支氣管上皮細(xì)胞 HBE135-E6E7

人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞 HBL-100

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 HCC 38

人乳腺癌細(xì)胞 HCC1937

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+LUC

人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化)  HCC-94

人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞 hccc-9810

人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞 HCC-LM3

永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 HCMEC/D3

人結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT116

人結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCT116+LUC

人結(jié)腸癌細(xì)胞 hct-15

人結(jié)直腸癌耐藥株 HCT15/Fu

人結(jié)直腸癌耐藥株 HCT-15/Taxol

人結(jié)直腸癌癌細(xì)胞 HCT-8

人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-A

人子宮膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B

人胚腎細(xì)胞 HEK-293（293）

人胚腎細(xì)胞 HEK-293A

人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 HEL

人子宮頸癌細(xì)胞 HELA

人宮頸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HELA+LUC  

01 什么是細(xì)胞永生化,？

   正常組織來源的細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下可分裂生長，但經(jīng)過有限次數(shù)的傳代后，就會停止增殖,，發(fā)生衰老和死亡,，這種現(xiàn)象稱之為海夫利克極限。有的細(xì)胞自發(fā)或受外界因素的影響,，可以從增殖衰老危機(jī)中逃離,，從而擁有無限增殖的能力，該過程稱之為細(xì)胞永生化（cell immortalization）,。

   細(xì)胞永生化是癌變的必經(jīng)途徑,。

02 細(xì)胞永生化的方法？

   細(xì)胞自發(fā)永生化的幾率非常小,，于人類細(xì)胞就更為罕見,。

   人為干涉讓細(xì)胞永生化的方法包括：放射處理、端粒酶激活,、病毒基因轉(zhuǎn)染,、原癌基因激活、抑癌基因抑制等,。其中,，聽過慢病毒感染使細(xì)胞過表達(dá)猴腎病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶hTERT基因，是常用的兩種細(xì)胞永生化的方法,。

01端粒酶激活

   端粒酶是一種能延長端粒末端的核糖核蛋白酶,，由RNA和蛋白質(zhì)組成。端粒酶能以自身的RNA為模板,，從端粒DNA3’-OH 末端延伸端?；蚝铣尚碌亩肆NA， 以補(bǔ)償細(xì)胞分裂時染色體末端的縮短,，從而維持端粒的長度,，使細(xì)胞不會因端粒耗盡而出現(xiàn)凋亡。

   正常情況下,，大多數(shù)體細(xì)胞端粒酶的表達(dá)是嚴(yán)格調(diào)控的,，表達(dá)是瞬時和低水平的。在原代培養(yǎng)的細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)人端粒酶催化亞基(hTERT)基因能穩(wěn)定端粒的長度,，使細(xì)胞易于永生化,，因此hTERT的激活是細(xì)胞永生化的重要步驟。

   雖然激活端粒酶活性能夠使多種人和動物的細(xì)胞永生化,，但是對于有些細(xì)胞,，重建端粒酶活性并不足以使細(xì)胞永生化，還需要借助癌基因法,。

02癌基因法

   一些原癌基因，如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2,，通過基因轉(zhuǎn)染可介導(dǎo)目的細(xì)胞永生化,。c-Myc是最早被發(fā)現(xiàn)的原癌基因,，有許多與瘤化相關(guān)的功能區(qū)域，其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的蛋白通過核膜進(jìn)入細(xì)胞核與端粒酶的啟動子結(jié)合位點特異性結(jié)合,，誘導(dǎo)端粒酶mRNA快速表達(dá),，直接激活端粒酶活性，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入永生化,。

   細(xì)胞永生化過程中,，抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等，通過等位基因隱性作用,、抑癌基因的顯性負(fù)作用等逐漸失去活性,，細(xì)胞老化途徑受阻。實驗證明端粒酶的活性與抑癌基因表達(dá)產(chǎn)物的下調(diào)有相關(guān)關(guān)系,，推測抑癌基因的失活協(xié)同端粒酶的激活共同參與細(xì)胞永生化進(jìn)程,。

03病毒基因轉(zhuǎn)染

很多病毒感染能夠誘導(dǎo)細(xì)胞永生化，例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV),、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV),。這些病毒感染其天然宿主細(xì)胞，能誘導(dǎo)細(xì)胞永生化,。

   EBV能使B淋巴母細(xì)胞永生化形成淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系,，它是通過潛伏蛋白激活細(xì)胞因子與其受體相互作用的途徑使細(xì)胞永生的。EBV永生化B細(xì)胞的一個顯著的特點是端粒酶活性的提高,，這可能是導(dǎo)致B細(xì)胞永生的主要原因,。目前，EB病毒介導(dǎo)的細(xì)胞永生化應(yīng)用最多的是B淋巴細(xì)胞,，其他細(xì)胞中的應(yīng)用很少,。

   SV40是簡單的真核細(xì)胞病毒，SV40的T抗原片段是常用的目的片段,，將其整合入靶細(xì)胞核內(nèi)并表達(dá),，可導(dǎo)致細(xì)胞增殖活力的改變并表現(xiàn)出多種與腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)化顯型。應(yīng)用的方法包括：野生型SV40病毒共培養(yǎng)感染靶細(xì)胞,、磷酸鈣法,、電穿孔以及逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法等。

   HPV已成功將人的包皮細(xì)胞,、角化上皮以及乳腺,、胰導(dǎo)管和口腔等的上皮細(xì)胞永生化。HPV病毒的早期表達(dá)蛋白E6和E7在細(xì)胞永生化中起決定性作用,。E6和E7蛋白能夠改變細(xì)胞的終末分化,，誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入S期，使細(xì)胞繞過正常細(xì)胞的周期檢查點。