名稱：胃癌類器官培養(yǎng)基

貨號：WS013-100ml/WS013-500ml

規(guī)格：100ml/500ml

品牌：WinSera

一,、產(chǎn)品描述：

胃癌類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基可應(yīng)用于人胃癌來源類器官的常規(guī)培養(yǎng)傳代，能夠保持其傳代后的生長活力,，類器官培養(yǎng)過程中，不用添加任何其他蛋白因子,。

二,、使用方法：

1. 原代
（1）取材后的胃癌組織須在 2-8℃含有組織保存液的取樣瓶中，快速轉(zhuǎn)運至潔凈實驗室進行組織處理和干細(xì)胞分離,，拍照并登記信息,。
（2）準(zhǔn)備若干培養(yǎng)皿,，加入 4℃預(yù)冷的類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 備用,。
（3）取樣瓶消毒，將組織放入培養(yǎng)皿中,，利用類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 清洗三次后,，利用眼科剪或手術(shù)dao將腫瘤組織jian切成體積約為 1-3 mm3 的組織塊。

（4）組織用原代組織xiao化液#abs9522 消化,，37℃震蕩消化10-20 min,，（消化過程中隨時觀察消化情況）。
（5）取少量液體在顯微鏡下觀察,，鏡下觀察到較多的單個細(xì)胞或 70 um 以下的細(xì)胞簇后,，加入三倍體積類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 終止消化。
（6）使用100 um孔徑的篩網(wǎng)進行過濾,，將濾液收集后,，于300 g富集離心5 min后移去上清，添加類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 重新重懸離心,。
（7）基質(zhì)膠計算：第6步后觀察收集到的組織體積,，添加25倍組織體積的基質(zhì)膠重懸鋪板。
（8）24孔細(xì)胞培養(yǎng)板為例,，每孔點膠25ul組織基質(zhì)膠混合物進行鋪板（4℃下操作）,。
（9）將鋪好的培養(yǎng)板放入37℃培養(yǎng)箱中10-15 min成膠，添加培養(yǎng)基（恢復(fù)室溫）進行培養(yǎng),。
2. 類器官傳代培養(yǎng)
（1）移液器吸去培養(yǎng)基,，每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液#abs9543放置2 min。
（2）移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠,，收集在15 ml離心管中,，4℃靜置10 min,。（每6-8孔為一組）
（3）① 類器官數(shù)量不足或體積較小時： 離心5 min棄去上清，添加適量類器官緩沖液#abs9543 重懸移入1.5 ml離心管,，300 g離心5 min棄去液體進行第4步,。
② 類器官數(shù)量較多或體積較大時：離心5 min棄去上清，添加適量類器官傳代消化液#abs9520 消化2-3min,，添加類器官緩沖液#abs9543 終止消化,，離心5min棄去混合液，添加適量類器官緩沖液#abs9543重懸移入1.5 ml離心管,，300 g離心5 min棄去液體進行第4步,。
（4）類器官收集后，添加基質(zhì)膠重懸,，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,，放置培養(yǎng)箱中10-15 min添加500 ul培養(yǎng)基。
3. 類器官凍存
（1）移液器吸去培養(yǎng)基,，每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液#abs9543 放置2 min,。
（2）移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中,，4℃靜置10 min,。（每6-8孔為一組）
（3）離心5 min棄去上清，添加適量類器官緩沖液#abs9543 再次重懸,，300 g離心5 min棄去液體,。
（4）添加適量類器官凍存液#abs9519 ，輕柔吹打重懸,，以24孔細(xì)胞培養(yǎng)板為例：密度為2個孔凍存1管,，每管體積4 ml。
（5）做好標(biāo)記信息,，進行程序降溫后,，移入液氮長期保存。
4. 類器官復(fù)蘇
（1）取10 ml類器官培養(yǎng)緩沖液#abs9543 于15 ml離心管中,。
（2）從液氮罐中取出凍存的類器官細(xì)胞,，快速置于 37℃水浴鍋中融解。
（3）水浴融解過程中,，需輕輕搖動冷凍管,，以確保凍存液在 1-2 min內(nèi)全部融解。
（4）將溶解后的類器官細(xì)胞快速轉(zhuǎn)移至15 ml 離心管,，使用移液管輕輕吹打6-8次,，300 g 離心 5 min，然后除去上清液并收集類器官細(xì)胞沉淀,。添加適量類器官緩沖液#abs9543 重懸移入5 ml離心管300 g離心5 min,。
（5）基質(zhì)膠重懸,，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，放置培養(yǎng)箱中10-15 min成膠,，添加500 ul培養(yǎng)基,。

三、儲存/保存方法

4°C,，保質(zhì)期3個月,；-20°C，保質(zhì)期12個月

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溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實驗使用,，不支持臨床等研究