產(chǎn)品名稱：HOS人骨肉瘤細胞（傳代）   

細胞規(guī)格：1-3×10^6細胞量

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

培養(yǎng)液：DMEM+10% FBS

運輸方式：常溫順豐運輸和干冰順豐運輸

貨 期：復(fù)蘇細胞需要1-2周,，凍存細胞的需要3-5天（特殊情況會有說明）

質(zhì) 控：無支原體、無污染,、符合標(biāo)準(zhǔn)

研究范圍：僅供科研使用

HOS人骨肉瘤細胞（傳代）  

品 牌： NTC胎牛血清,、Sigma 胎牛血清、PAA 胎牛血清

貨 號：SFBE,、F2442,、A15-151

規(guī) 格： 500ml

溫馨提示：本產(chǎn)品僅限于非臨床科研用途。

運輸保存及注意點：

1.干冰全程運輸,，保證您的使用,！

2.-20℃，避光恒溫冰箱,，避免反復(fù)凍融,！

  我司主營產(chǎn)品是國內(nèi)傳代細胞和細胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO,、HyClone,、NTC、SIGMA,、 BI ,、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質(zhì)血清,。常規(guī)液體培養(yǎng)基,、胰酶、雙抗,、無血清凍存液,、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒,、Sigma現(xiàn)貨試劑等產(chǎn)品,。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購,！

    MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株,、HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株、LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株,、HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細胞,、HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株、PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼,、LOVO/ADR人結(jié)腸癌細胞阿霉素耐藥株,、HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株、SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株,、A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株,、MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株、A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株、SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株,、SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株,、HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株。

  3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細胞,、NIH/3T3小鼠胚胎細胞,、Raw264.7小鼠單核巨噬白血病細胞、B16-F10小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細胞,、B16 小鼠黑色素瘤細胞,、CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細胞、SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細胞,、F9 小鼠畸胎瘤細胞,、MLE-12 小鼠肺泡上皮細胞、Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細胞,、BV2 小鼠小膠質(zhì)細胞,、DC2.4小鼠樹突狀細胞、U14 小鼠子宮頸癌細胞,、M-NFS-60小鼠骨髓性白血病細胞,、mMSC小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞、HL-1小鼠心肌細胞,、TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細胞,、k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨細胞、mc3t3 e1小鼠胚胎成骨細胞前體細胞,、hepa1-6 小鼠肝癌細胞,、SP2/0小鼠骨髓瘤細胞、HT22小鼠海馬神經(jīng)元細胞系,、MC38小鼠結(jié)腸癌細胞,、mpc5小鼠足細胞、4T1 小鼠乳腺癌細胞,、ANA-1小鼠巨噬細胞,、TM4 小鼠睪丸支持細胞、STO 小鼠胚胎成纖維細胞,、bend.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞,、J774A.1小鼠單核巨噬細胞、H9C2 大鼠心肌細胞,、PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化),、PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)、AR42J 大鼠胰腺外分泌細胞,、IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細胞,、RT4-D6P2T 大鼠神經(jīng)鞘瘤細胞,、INS-1 大鼠胰島細胞瘤細胞、NRK-52E 大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細胞,、BHK-21 倉鼠腎成纖維細胞,、

PK-15 豬腎細胞、Duckembyro 鴨胚胎成纖維細胞,、vero 綠猴腎細胞,、Hep3B人肝癌細胞,、HPAC人胰腺癌細胞,、HT-1376 人膀胱癌細胞、JAR 人胎盤絨毛癌細胞,、KNS-89 人腦膠質(zhì)細胞瘤細胞,。

將動物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）,、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理,，分散成單細胞，置合適的培養(yǎng)基中培 養(yǎng),，使細胞得以生存,、生長和繁殖，這一過程稱原代培養(yǎng),。

操作步驟
（一）胰酶消化法
1,、器材：將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死，置75%酒精泡2—3秒鐘（時間不能過長,、以免酒精從口和肛門浸入體內(nèi)）再用碘酒消毒腹部,，取胎鼠帶 入超凈臺內(nèi)（或?qū)⑿律∈笤诔瑑襞_內(nèi)）解剖取肝臟，置平皿中,。
2,、用Hank’s液洗滌三次，并剔除脂肪,，結(jié)締組織,，血液等雜物。
3,、用手術(shù)剪將肝臟剪成小塊（1mm2）,，再用Hank’s液洗三次，轉(zhuǎn)移至小青霉素瓶中,。
4,、視組織塊量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分鐘,，每隔5分鐘振蕩一次,，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
5,、加入3—5ml培養(yǎng)液以終止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制劑）,。
6、靜置5—10分鐘,，使未分散的組織塊下沉,，取懸液加入到離心管中。
7,、1000rpm,，離心10分鐘，棄上清液,。
8,、加入Hank’s液5ml，沖散細胞,，再離心一次,，棄上清液。
9,、加入培養(yǎng)液l—2 ml（視細胞量）,，血球計數(shù)板計數(shù)。
10,、將細胞調(diào)整到5×105/ml左右,，轉(zhuǎn)移至25ml細胞培養(yǎng)瓶中，37℃下培養(yǎng),。 上述消化分離的方法是zui基本的方法,，在該方法的基礎(chǔ)上，可進一步分離不同細胞,。細胞分離的方法各實驗室不同,，所采用的消化酶也不相同（如 膠原酶，透明質(zhì)酶等）,。
Hyclone胎牛血清SH30084.03  ,、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 ,、Hyclone胎牛血清SH30396.03  ,、Hyclone胎牛血清SH30070.03

特級胎牛血清 SH30070.03E 、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  ,、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03  ,、活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI ,、

馬血清SH30074.03  ,、烏拉圭胎牛血清SV30087. 03 ,、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03,。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS ,、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 ,、PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151,。

BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級別胎牛血清 04-002-1A ,、BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A ,。

Corning胎牛血清 35-076-CV。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  ,、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 ,、PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602 ,、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P ,；

NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE、TCB胎牛血清 101ZC,。

Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 ,、Gemini特級胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 ,。 

Sigma 特級胎牛血清F2442 ,、Sigma正常人AB血清 H4522 。

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1,。

GIBCO胎牛血清盒裝A31608-02,、GIBCO馬血清16050-122、GIBCO 胎牛血清10270-106,、雙抗15140-122,、SV30010  、胰酶 25200-056,、SH30042.01 ,、GIBCO 胰酶 25200-072。

（二）組織塊直接培養(yǎng)法,。自上方法第3步后,，將組織塊轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶，貼附與瓶底面,。翻轉(zhuǎn)瓶底朝上,，將培養(yǎng)液加至瓶中，培養(yǎng)液勿接觸組織塊,。入37℃靜置3—5小時,，輕 輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,，使組織浸入培養(yǎng)液中（勿使組織漂起），37℃繼續(xù)培養(yǎng),。

雙抗 15140-122,、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT

DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培養(yǎng)基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培養(yǎng)基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01,、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS緩沖液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02

31232-250G C1184 76524-100MG 334065-50G R2625 650471-1L‍

203521-100G 75688 V900830-5G 262072-25G T7505 V900852-25G

379816-1G 193992 43820-10G C4151-5G T1503 D0550-100G

71643-250G B8026 52976-1MG-F 30435-500G C3389 P3803-100ml

I1406-250MG C3667 A7906 R3875-10MG B5887 82524-1KG‍

398853-5G C8356 T46108-100G 61197-250G H4272 P1609000

M7634-100G D8418 158534-10G V900271-500G D2629 383112-100G

63138-250G S5631 T2036-100MG M1880-500G C7698 14400-100MG

223506-25G A2058 A7085-100G 223506-500G P3932 K1512-500G

C7902-500G 219703 15972-5ML-F C5080-500G R7632 72609-100MG

21097-250G 12072 S3132-100MG 12022-1KG G3632 C2932-5MG

105937-5G S4641 R0901-100ML 459097-5G G9268 119660-25G

A6014-10G C9752 209465-25G B4554-25G T0303 R8004-5MG

258024-5G M4125 32417-500MG T3251-25G S5390 S8875-500G

B6149-25MG T2885 04269-1KG 11569-25MG C7902 206075-1G

71162-25G 230251 205796-2G N1376-25G A9434 E9508-100ML

G0639-5G-9 P1379 21479-1ML 381071-25G S5761 G25150-50G

B0750-500G M3516 17843-250G 73677-250MG S7795 A4106-25G

L2884-10MG C6905 65969-10MG L2884-5MG C6288 T9250-5G 

C2885-25G C0406 S9251-100g L8533-250MG S5761 P9380-5G

62613-250G P9155 13180-100ML 518018-10G L2880 A88182-100G

09830-500G A2427 21719-5ML-F 324817-250MG D5879 202185-25G

原代動物細胞培養(yǎng)：

1,、實驗材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存,，并盡快進行細胞分離實驗,。

2、無菌操作,。操作時用的培養(yǎng)液,，可加平時細胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。

3,、用酶法分離細胞時,，注意酶液的濃度和控制消化時間。

貼塊法分離細胞時,，注意動作要輕柔,，不要傷到細胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利于細胞游離,。

4,、培養(yǎng)液的選擇。不同的細胞有對培養(yǎng)液中營養(yǎng)的要求不同,，根據(jù)所分離細胞的特性選擇,。

傳代細胞培養(yǎng)：

1、無菌操作

2,、控制消化時間

3,、及時關(guān)注細胞生長狀態(tài)

神經(jīng)細胞的原代培養(yǎng)是盡 量 創(chuàng)造于各類神經(jīng)細胞生長的體外環(huán)境，獲得狀態(tài)良好,，純度較高細胞的方法 ,。 腦部組織來源的各種神經(jīng)細胞的培養(yǎng)具有相似的取材過程和部分通用的培養(yǎng)條件。

除動物消毒以外,，其他步驟都在超凈臺內(nèi)進行 ,。

1. 動物的消毒：根據(jù)培養(yǎng)細胞的類型和要求不同，常用胎鼠和新生鼠做神經(jīng)細胞的培養(yǎng),。消毒方法分別如下 ,。

(1) 孕鼠操作 孕鼠經(jīng)wu 巴 bi妥na麻醉后，以棉球蘸碘伏擦拭腹部毛皮消毒 ,。 擦拭從中心向外方向進行,，可更換棉球 1- 2次,，面積盡量大一些，包括整個腹部和外生殖器周圍 ,。 用第 1 套解剖器械打開動物腹腔,，換第 2 套器械分離子宮并置于含冷 D ­PBS 的 100mm 玻璃皿中，再換第 3 套器械在每只胎鼠的間隔處剪開子宮并剝離出胎鼠 ,。

(2) 仔鼠操作 仔鼠（新生 7d 以內(nèi)）直接浸泡于冰的 75%酒精中,， -20℃冰箱低溫消毒 10min 左右，動物失去知覺即可開始取材 ,。

2. 皮層組織的分離：新生鼠使用眼科剪將動物斷頭,，并用鑷子剝除頭部的皮膚 。在冰 D -PBS 液中沿顱骨人字縫從后向前剝離 ,。 一般左手持彎鑷,，在動物兩眼處以適當(dāng)力度固定；右手持直鑷,，完成剝除皮膚 ,、 骨骼以及分離組織等工作 。 在顯微鏡下利用精細器械分離皮層或海馬時,，沿皮層邊緣以 45° 角小心劃開,，并逐步使之剝離，轉(zhuǎn)移組織入盛有冰 D - PBS 液的 35mm 小皿中,；然后用精細器械仔細去除每個皮層或海馬的腦膜（整個過程需要在低溫冰袋上完成） 。

3.組織的分散,；用管口較粗的彎頭滴管吸去帶有腦膜的 D - PBS, 盡zui去除干凈液體并避免吸走組織,；用虹膜剪將組織逐撮均勻剪成乳糜狀，使組織塊為 lmm3 的大小為宜 ,。 加入合適體積的消化液（－般蓋過組織塊并且可以隨意搖晃即可）,，并均勻分散組織，放入37°C 孵育箱中消化約 15min (每間隔 3 -5min 用手輕輕搖晃1次,，動物胎齡越小,，越容易分散，消化時間可相應(yīng)縮短） ,。

4. 單細胞懸液的制備!用口徑較粗的彎頭滴管將消化好的組織吸入含 3 - 5ml 冰的*培養(yǎng)基的 10ml 離心管中,，靜置 5min 左右 。 用同樣的滴管將沉底的組織轉(zhuǎn)移到另 一個含約 5ml 冰的*培養(yǎng)基的 10ml 離心管中,，并開始吹打 ,。 吹打時每次不超過 15 次，先用粗口徑的彎頭滴管吹散,，靜置片刻后將上清用細口徑彎頭滴管轉(zhuǎn)移至另 一個離心管中,，并再吹打 15 次左右 ,。 在原先含沉淀的離心管中再加入*培養(yǎng)基繼續(xù)吹打，并收集上清重復(fù)上述過程 ,。 反復(fù)吹打幾次后,，組織塊基本消失，將全部上清過 200 目篩網(wǎng)以去除剩余組織塊并收集,、計數(shù) ,。 離心 (900r/min, 5min) 去除細胞碎片并將細胞重懸至合適的體積，以備后用 ,。

1.在做原代之前準(zhǔn)備工作一定要做好,，提前配好液體。整個操作過程注意無菌,，且培養(yǎng)液中如無特殊說明,，均含有青－鏈霉素（雙抗）。

2.動物消毒應(yīng)在遠離超凈工作臺的區(qū)域完成,，成年動物尤其要注意,。

3.組織取材過程全部在低溫環(huán)境中進行，可大大提高細胞存活,；而且整個過程不宜太久,，否則細胞活性明顯降低。

4.在組織分散過程中,，一般3只左右動物來源的皮層在一個小皿中剪碎消化,，不宜在同一個小皿中處理過多的組織。

5.吹打細胞用的彎頭滴管一定要事先經(jīng)火焰拋光,，否則細胞極易受傷而死亡,；而且吹打細胞懸液時盡量避免產(chǎn)生過多氣泡，可以提高細胞的存活,。

6.基本上原代培養(yǎng)的各種神經(jīng)細胞都需要生長在經(jīng)特殊物質(zhì)處理過的培養(yǎng)介質(zhì)上,，比如多聚賴氨酸、層黏連蛋白等,。

1.大鼠和小鼠來源的神經(jīng)細胞培養(yǎng)方法大致上相同,，除特殊提到以外，基本可以通用,。

2.去除腦膜時,，一般左手持懾輕柔固定組織，右手負責(zé)剝離,。整塊腦膜一同被剝離后,，往往細胞培養(yǎng)物中的成纖維細胞污染較少。

3.胰酶消化液處理后的組織往往發(fā)黏,，這是細胞釋放出DNA的原因,。這并不會影響消化效果,，而且可以在后面的吹打過程中去除。對于初學(xué)者,，可以通過在消化液中加入DNA酶的方法提高zui終細胞的產(chǎn)量,。

4.在胰酶消化液中加入EDTA有利于組織細胞團分散成單細胞，終止EDTA的作用主要依靠稀釋以降低其濃度,。