無外泌體胎牛血清 FBS050-EXO|WINSERA

名稱：無外泌體胎牛血清

貨號： FBS050-EXO

規(guī)格：50ML

品牌：WINSERA

在細胞培養(yǎng)實驗中，胎牛血清（FBS）一直是不能缺少的營養(yǎng)補充劑,。然而，傳統(tǒng)FBS中含有大量外泌體，可能干擾實驗結(jié)果，特別是在干細胞研究,、腫瘤微環(huán)境分析及外泌體相關(guān)實驗中。蘇州千舍生物科技有限公司推出的無外泌體特級胎牛血清（Exosome-Free FBS）,，通過超高速離心結(jié)合納米過濾技術(shù)，有效去除外泌體,，確保實驗數(shù)據(jù)的準確性和可重復(fù)性,。

關(guān)鍵優(yōu)勢：

高純度：外泌體去除率>99%，避免外源性RNA,、蛋白質(zhì)干擾

高穩(wěn)定性：批次間差異極小,，適用于長期實驗

低內(nèi)毒素：<1 EU/mL，減少細胞毒性風(fēng)險

1、培養(yǎng)細胞時,，如何去除血清來源的外泌體,？    

多數(shù)情況下，細胞在體外培時養(yǎng)需要血清,，而血清中一般都含有外泌體,，為避免血清對細胞外泌體的污染，可采用以下兩種方法： （1）將細胞培養(yǎng)用的血清通過100000 g超速離心10h以去除血清外泌體,； （2）選擇無血清培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng),。  

2、無外泌體血清培養(yǎng)基（或者無血清培養(yǎng)基）在什么時候使用,？    

細胞在正常含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定的時間后,，細胞融合度約為60%-70%時，移去原有含血清的培養(yǎng)基,，換成新鮮的無外泌體血清培養(yǎng)基（或者無血清培養(yǎng)基）,，繼續(xù)培養(yǎng)24-48h，細胞融合度達到80%-95%左右時收取上清,，該上清液即可用于提取外泌體,。   

3、細胞培養(yǎng)過程中的死細胞是否會影響外泌體的提??？    會的。在收獲細胞時,，應(yīng)確定死亡細胞占比不超過5%,。細胞凋亡/死亡過程中會釋放大量大小不等的囊泡，它們在外泌體的提取純化過程中會污染活細胞產(chǎn)生的外泌體,。  

4,、準備做細胞外泌體Small RNA的NGS測序，初始樣品量需要準備多少,？    普通腫瘤細胞系推薦使用40mL以上的初始樣品量,。由于某些細胞（如懸浮細胞、干細胞,、神經(jīng)細胞等）中外泌體含量比較低,，建議先通過10kD超濾柱濃縮，準備40mL以上的濃縮液再進行超速離心分離外泌體,，一般需提取到20ng以上的Total RNA,。  

5、進行外泌體RNA RT-PCR實驗推薦什么內(nèi)參,？    取決于具體樣品,，可以選擇外源添加cel-miR-39-3p,，或內(nèi)源U6、SNORD61,、SNORD68,、SNORD72作為內(nèi)參。    

6,、提取的外泌體進行Western blot前是否需要加入RIPA試劑裂解,？    需要，一般按照1:1的比例加入RIPA試劑,。  

7,、進行外泌體Western blot鑒定時有無內(nèi)參蛋白可供選擇？    無,，該檢測屬于定性檢測,，更多的是用等蛋白定量校準樣品間的差異。

8,、組織細胞外泌體如何提?。?/span>    無菌環(huán)境下將組織剪成小塊（越小越好）,，然后在無血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h,；將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心管中，于4℃以3000g離心20 min去除培養(yǎng)液中雜質(zhì)和細胞碎片,，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,；先使用0.45μm濾器過濾上清液，接著使用0.2μm濾器過濾上清液,，再進行超速離心分離外泌體,。有條件的話建議采用Transwell小室培養(yǎng)的方式，效果更佳,。    

9,、如何鑒定提取的外泌體？     

 通常使用透射電鏡檢測（形態(tài)）,、粒徑檢測（大?。?/span>Western blot檢測等方法鑒定提取的外泌體,。在進行Western blot檢測時,，通常檢測外泌體標志蛋白（CD63、CD9,、CD81,、TSG101等），按照國際細胞外囊泡協(xié)會的建議為檢測2個陽性和1個陰性指標,。

10,、粘度過大的樣品如何處理？    如果樣品粘度過大時（因細胞分泌物較多所致）,，可將樣品用1×PBS緩沖液進行等體積稀釋,。

11、外泌體電鏡是不是一定要有膜結(jié)構(gòu),？

 負染電鏡結(jié)果中外泌體的形態(tài)是那種明顯的茶托樣,，邊緣有一圈略微更明亮的亮圈。如果結(jié)構(gòu)是沒有膜結(jié)構(gòu)的圓球形,，很可能是脂蛋白顆?；蛘弑F的蛋白質(zhì)。    

12,、分離外泌體前能加RNA保護劑嗎,？    分離外泌體前的樣品不能加入任何RNA保護劑（如Trizol）。