細胞收到后注意事項

1,、收到細胞,，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出,，是否渾濁,，如有請盡快聯(lián)系

2、收到細胞,，如包裝完好,，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時,，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶,，先不要把培養(yǎng)基吸出來。應立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右,，讓細胞先穩(wěn)定下,，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁,。如細胞仍不能貼壁,，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理

3. 收到細胞時如無異常情況 ,，請在顯微鏡下觀察細胞密度,，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時,，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,。噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作：然后打開蓋子，先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ML左右,，放在離心管里,，然后瓶口過火，（嚴禁直接傾倒）,，這樣可以保證不污染,，再用10ML的移液管，將剩余的培養(yǎng)基全部吸出,，放于離心管中,，培養(yǎng)瓶中只剩余5-10ML左右培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)就可以了）：超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。

如為懸浮細胞,，吸出培養(yǎng)液，1000轉/分鐘離心3-5分鐘,，吸出上清,，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

4,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,，存放于4℃冰箱,，以備不時之需。第二天換液時,，要配制新鮮的培養(yǎng)基和進口胎牛血清,。這樣對細胞生長更好。不要再用我們原瓶的培養(yǎng)基了,。

5 ,、24小時后，細胞形態(tài)已恢復并貼滿瓶壁,，就可以傳代了,。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS或Hanks’液洗滌后棄去,。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化,，消化時間以具體細胞為準，一般1-3分鐘,，不超過5分鐘,。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化,。輕輕晃動瓶壁,，見細胞脫落下來,，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,，使之wan全脫落,，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min,。棄上清，視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù),，一般一傳二,，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀,，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,，以具體細胞和經驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁,，直接將溶液吸入離心管離心即可,。

6，貼壁細胞 ,，懸浮細胞,。嚴格無菌操作。換液時,，換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液和進口胎牛血清,，37度    5%CO2 培養(yǎng)

7.  收到細胞后，請鏡下觀察細胞,，用恰當方式處理細胞,。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞,，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中,。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基,，使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,，若細胞不多時 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右 ,，血清濃度還是在10％,。

 胰蛋白酶消化；

加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗（沖洗）,，加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細胞最好,，最佳消化溫度是37℃,。顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質回縮，細胞之間不再連接成片,，表明此時細胞消化適度,。吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管,，加入新鮮的培養(yǎng)液,。

吹打分散細胞：

吹打制懸：用滴管將已經消化細胞吹打成細胞懸液。吸細胞懸液入離心管：將細胞懸液吸入10ml離心管中.平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機中,，以1000轉/分鐘離心6-8分鐘,。棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液,，加入2ml培養(yǎng)液,， 用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液。