NTC胎牛血清出現(xiàn)顏色或沉淀的問題

NTC胎牛血清

貨號：SFBE

阿根廷

1,、問：我用的是四季青的胎牛血清,，56℃30分鐘滅活后出現(xiàn)了白色少量絮狀沉淀，是不是污染,？還能不能 再用,？血清的生產(chǎn)日期是2006年7月(現(xiàn)在是2007年6月11日)。

答：應(yīng)該問題不大,。你可以取少量血清放入培養(yǎng)皿中,，37℃過夜培養(yǎng)看看就知道是否污染了。血清中沉淀 物的出現(xiàn)有許多種原因,，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在 血渭解凍后，也會存在于血清中,，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量,。 若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,。

2、問：我用MTT法測細胞的增殖,，用DMSO裂解細胞,，發(fā)現(xiàn)把DMSO加入到孔中就會形成乳白色(用的含胎牛血 清的1640培養(yǎng)基，由于沒有離板子的離心機,，所以沒有去除培養(yǎng)基直接加的DMSO),。以前用含小牛血清的培養(yǎng)基沒有 看到有這種情況。該怎么解決,？

答：為什么要用離心機離心呢,？難倒你養(yǎng)的是懸浮細胞嗎？如果是貼壁細胞的話直接將MTT倒掉,，再加DMSO 即可,，我們就是這么做的，效果很好,！并且測細胞的增殖的話如果不去掉MTT就加DMSO的話誤差應(yīng)該很大,！有時不一定就是血清的原因,，可能跟你的MTT放置的時間或以及其他成分有關(guān)！

原代培養(yǎng)：

當采用外科操作的方法將細胞從有機體中分離下來,，然后置于合適的培養(yǎng)環(huán)境中,，它們會附著、分裂和生長,。這稱為原代培養(yǎng),。

原代培養(yǎng)有兩種基本的方法。

第一種,，使用外植塊,，將小片的組織粘附到玻璃或經(jīng)處理的塑料培養(yǎng)瓶中，并浸于培養(yǎng)液中,。幾天之后,，單個細胞將從組織外植塊中移動到培養(yǎng)瓶的表面或基質(zhì)中開始分裂生長。

第二種方法,，也是使用更廣泛的方法,，通過在組織碎片中加入消化（蛋白水解）酶，如胰酶或膠原酶,，消化成團聚集的細胞從而加快這一步驟,。最終得到單細胞的懸液，然后將其置于含有培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶內(nèi),，讓其繼續(xù)生長分裂,。這種方法成為酶解。

3,、問：(1)GIBCO胎牛血清500ml,，今天解凍后沒有混勻直接分裝，結(jié)果使得前面的幾管是清亮的,，后面就 帶有棕色的,，不知有沒有影響？估計有什么影響,？前面的成分好還是棕色的成分好?。?/span>

答：肯定有,。最好還是重新混合重新分裝,，我覺得有效成分會集中在棕顏色部分。

問：(2)為什么會出現(xiàn)棕色呢,？

答：血清中的棕色多一些可能是因為紅蛋白的含量高些的緣故吧,。

問：(3)血清滅活之后可以存放嗎？我的是前天mie活的,，但是沒有加到培養(yǎng)基里,，而是放在冰箱里,，那下次 可以直接用嗎？還是再次滅活??？

答：當然可以，如果多的話,，分裝后最好放在－20℃,，下次用時再解凍，也不用再滅活,。最好用一管拿一 管，少許血清可以放在4℃,。分裝時還要注意不要裝得太滿,，以免溢出污染。

關(guān)于心肌細胞元代培養(yǎng)的FBS問題：

 (1)1%的血清wan全培養(yǎng)基可不可以,，得看你胰酶的用量,。但是在心肌細胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBSwan全培養(yǎng)基效果都不太好,，開始心肌細胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS,，20%左右，但這就有出現(xiàn)另一個問題,，在FBSwan全培 養(yǎng)基中,，成纖維細胞呈優(yōu)勢細胞，須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長,，純化心肌細胞,。

 (2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 ,。

 (3)元代心肌細胞培養(yǎng)的FBS使用,，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的 DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng),。