細胞培養(yǎng)過程中應(yīng)該注意哪些問題,？

#1細胞培養(yǎng)步驟一般包括：解凍、培養(yǎng),、分盤,、凍存?；旧隙甲裱@個步驟,，細胞轉(zhuǎn)染過程，我們往往發(fā)生在步驟3,，在做細胞功能性實驗時,，往往在步驟2，解凍和凍存就是細胞的儲藏和分離的過程,。

#2首先我們要獲得細胞,，一般受大家比較認可的細胞庫有1962年ATCC建立的CELL LINES、中科院,、DSMZ等機構(gòu),。

#3細胞解凍要求37度快速解凍，另外就是注意不同細胞的培養(yǎng)條件,。

#4同規(guī)格培養(yǎng)器皿所需要的細胞生長密度也不同,，如下圖：

#5細胞生長會產(chǎn)生各種代謝廢物,，造成培養(yǎng)液PH變化,，所以培養(yǎng)過程中,，遇到細胞培養(yǎng)液變化較為明顯時，要及時更換培養(yǎng)液,，保證細胞的正常生長,。

#6細胞離心時也要注意，強烈的離心力會使得細胞大量積聚離心管底部,，造成大量細胞擠壓破碎,，一般不要超過300g，5-10min即可,。

#7此外離心機分為固定轉(zhuǎn)角離心機和自由轉(zhuǎn)角離心機,，固定轉(zhuǎn)角的離心機會使細胞堆積在側(cè)壁，容易造成一些細胞離心不充分,，造成細胞的丟失,，相反，自由轉(zhuǎn)角離心機能很好解決這個問題所以,，我們一般盡量使用自由轉(zhuǎn)角離心機,。

1、細胞系（細胞株）

細胞系是來自多細胞生物體的細胞群體,，其通常不會無限增殖,，但是由于突變，逃避了正常細胞的衰老,，從而可以持續(xù)分裂的一種細胞的集合,。

因此，細胞可以在體外長時間生長,。細胞系是研究多細胞生物體的生物化學(xué)和細胞生物學(xué)的非常重要的工具,，例如信號通路、腫瘤殺傷,、細胞增殖,、細胞周期、突變分析,、基因表達,、蛋白表達、細胞分化等等,。此外,，永生化的細胞系也已經(jīng)在生物技術(shù)中得到應(yīng)用，比如建立新來源,、新突變的細胞系,。

2、克隆細胞株

從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,，由單細胞增殖形成的細胞群,，稱細胞株,。再由原細胞株進一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細胞群，亦可稱之為亞株,。

3,、二倍體細胞

細胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細胞染色體數(shù)相同或基本相同（ 2n 細胞占 75%或 80%以上）的細胞群，稱二倍體細胞培養(yǎng),。如僅數(shù)目相同,，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期,，故屬有限細胞系,。

但隨供體年齡和組織細胞的不同，二倍體細胞的壽命長短各異,。人胚肺成纖維細胞可傳50代±10代,，人胚腎只有8—10代，人胚神經(jīng)膠質(zhì)細胞15—30 代,；如從老齡個體取材培養(yǎng),，則細胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細胞系可供研究衰老之用,。為保持二倍體細胞能長期被利用,，一般在初代或 2— 5 代即大量凍存作為原種，用時再進行增殖培養(yǎng),，用后再繼續(xù)凍存,，可供長期使用和延緩細胞的衰老。

4,、初代培養(yǎng)（原代細胞培養(yǎng)）

原代培養(yǎng)是從供體獲取組織后的第一次培養(yǎng),，其優(yōu)點是：組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化,，具有二倍體遺傳性狀,，在供體來源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下（年齡,、性別）,，在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。原代培養(yǎng)所在機能上的改變,，主要是表型上的改變,，不一定為體細胞突變。從理論上講,，人們有可能創(chuàng)造出一種條件,，使原代培養(yǎng)細胞恢復(fù)體內(nèi)時的機能，因此原代培養(yǎng)細胞是研究基因表達的理想系統(tǒng)。采用原代培養(yǎng)細胞做實驗,，如藥物測試等效果也很好,；原代培養(yǎng)也是建立各種細胞系（株）必須經(jīng)過的階段。有一點也要注意到,，原代培養(yǎng)的組織是由多種細胞成分組成的,，比較復(fù)雜,。

即使培養(yǎng)的是較純的單一類型的細胞,，如上皮或成纖維細胞，也仍存在著異質(zhì)性,，在分析細胞生物學(xué)特性時仍有一定困難,。此外由于不同供體不同批次差異及其它一些原因，細胞生長效果有時也會不一致,。

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2,、血清如何保存, 可以放多久？

3,、貯藏溫度≤-15℃,，可長時間保存； 4℃存放時,，請勿超過一個月,。

4、血清溶解以后,，出現(xiàn)沉淀怎么辦?

5,、若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400-600g離心5min,，上清液即可加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng)。 我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,， 一方面它可能會阻塞您的過濾膜,；另一方面，過濾血清這種行為可能會導(dǎo)致血清中部分營養(yǎng)成分的流失,。