細(xì)胞培養(yǎng)過程中應(yīng)該注意哪些問題,？

#1細(xì)胞培養(yǎng)步驟一般包括：解凍、培養(yǎng),、分盤,、凍存?；旧隙甲裱@個步驟,，細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程，我們往往發(fā)生在步驟3,，在做細(xì)胞功能性實(shí)驗(yàn)時,，往往在步驟2，解凍和凍存就是細(xì)胞的儲藏和分離的過程,。

#2首先我們要獲得細(xì)胞,，一般受大家比較認(rèn)可的細(xì)胞庫有1962年ATCC建立的CELL LINES,、中科院、DSMZ等機(jī)構(gòu),。

#3細(xì)胞解凍要求37度快速解凍,，另外就是注意不同細(xì)胞的培養(yǎng)條件。

#4同規(guī)格培養(yǎng)器皿所需要的細(xì)胞生長密度也不同,，如下圖：

#5細(xì)胞生長會產(chǎn)生各種代謝廢物,，造成培養(yǎng)液PH變化，所以培養(yǎng)過程中,，遇到細(xì)胞培養(yǎng)液變化較為明顯時,，要及時更換培養(yǎng)液，保證細(xì)胞的正常生長,。

#6細(xì)胞離心時也要注意,，強(qiáng)烈的離心力會使得細(xì)胞大量積聚離心管底部，造成大量細(xì)胞擠壓破碎,，一般不要超過300g,，5-10min即可。

#7此外離心機(jī)分為固定轉(zhuǎn)角離心機(jī)和自由轉(zhuǎn)角離心機(jī),，固定轉(zhuǎn)角的離心機(jī)會使細(xì)胞堆積在側(cè)壁,，容易造成一些細(xì)胞離心不充分，造成細(xì)胞的丟失,，相反,，自由轉(zhuǎn)角離心機(jī)能很好解決這個問題所以，我們一般盡量使用自由轉(zhuǎn)角離心機(jī),。

1,、細(xì)胞系（細(xì)胞株）

細(xì)胞系是來自多細(xì)胞生物體的細(xì)胞群體，其通常不會無限增殖,，但是由于突變,，逃避了正常細(xì)胞的衰老，從而可以持續(xù)分裂的一種細(xì)胞的集合,。

因此,，細(xì)胞可以在體外長時間生長。細(xì)胞系是研究多細(xì)胞生物體的生物化學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的非常重要的工具,，例如信號通路,、腫瘤殺傷、細(xì)胞增殖,、細(xì)胞周期,、突變分析、基因表達(dá)、蛋白表達(dá),、細(xì)胞分化等等,。此外，永生化的細(xì)胞系也已經(jīng)在生物技術(shù)中得到應(yīng)用,，比如建立新來源,、新突變的細(xì)胞系。

2,、克隆細(xì)胞株

從一個經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株,。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群,，亦可稱之為亞株。

3,、二倍體細(xì)胞

細(xì)胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細(xì)胞染色體數(shù)相同或基本相同（ 2n 細(xì)胞占 75%或 80%以上）的細(xì)胞群,，稱二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同,，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體,。二倍體細(xì)胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細(xì)胞系,。

但隨供體年齡和組織細(xì)胞的不同,，二倍體細(xì)胞的壽命長短各異,。人胚肺成纖維細(xì)胞可傳50代±10代,，人胚腎只有8—10代，人胚神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞15—30 代,；如從老齡個體取材培養(yǎng),，則細(xì)胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細(xì)胞系可供研究衰老之用,。為保持二倍體細(xì)胞能長期被利用,，一般在初代或 2— 5 代即大量凍存作為原種，用時再進(jìn)行增殖培養(yǎng),，用后再繼續(xù)凍存,，可供長期使用和延緩細(xì)胞的衰老。

4,、初代培養(yǎng)（原代細(xì)胞培養(yǎng)）

原代培養(yǎng)是從供體獲取組織后的第一次培養(yǎng),，其優(yōu)點(diǎn)是：組織和細(xì)胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化,，具有二倍體遺傳性狀,，在供體來源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下（年齡,、性別）,，在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài),。原代培養(yǎng)所在機(jī)能上的改變，主要是表型上的改變,，不一定為體細(xì)胞突變,。從理論上講，人們有可能創(chuàng)造出一種條件,，使原代培養(yǎng)細(xì)胞恢復(fù)體內(nèi)時的機(jī)能,，因此原代培養(yǎng)細(xì)胞是研究基因表達(dá)的理想系統(tǒng)。采用原代培養(yǎng)細(xì)胞做實(shí)驗(yàn),，如藥物測試等效果也很好,；原代培養(yǎng)也是建立各種細(xì)胞系（株）必須經(jīng)過的階段。有一點(diǎn)也要注意到,，原代培養(yǎng)的組織是由多種細(xì)胞成分組成的,，比較復(fù)雜。

即使培養(yǎng)的是較純的單一類型的細(xì)胞,，如上皮或成纖維細(xì)胞,，也仍存在著異質(zhì)性，在分析細(xì)胞生物學(xué)特性時仍有一定困難,。此外由于不同供體不同批次差異及其它一些原因,，細(xì)胞生長效果有時也會不一致。

WINSERA®特級胎牛血清適合培養(yǎng)哪些細(xì)胞,？

1,、特級胎牛血清具有非常好的促細(xì)胞生長能力，適合培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞,，原代細(xì)胞,，部分干細(xì)胞和嬌貴細(xì)胞。

2,、血清如何保存, 可以放多久,？

3、貯藏溫度≤-15℃,，可長時間保存,； 4℃存放時，請勿超過一個月,。

4,、血清溶解以后，出現(xiàn)沉淀怎么辦?

5,、若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400-600g離心5min，上清液即可加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng),。 我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,， 一方面它可能會阻塞您的過濾膜；另一方面,，過濾血清這種行為可能會導(dǎo)致血清中部分營養(yǎng)成分的流失,。