LNCAP細(xì)胞培養(yǎng)小技巧

簡介:

細(xì)胞名稱：人前列腺癌細(xì)胞LNCaP clone FGC

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

生長狀態(tài)：貼壁生長

LNcapcloneFGC,，人前列腺癌細(xì)胞,，1977年從一名患有前列腺癌的50歲男性的左鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中建立，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移,；文獻(xiàn)中描述細(xì)胞對(duì)雄激素敏感,。

該細(xì)胞培養(yǎng)期間會(huì)遇到那些問題或者特殊需求呢？

1,、生長速度緩慢,。

2、培養(yǎng)一段時(shí)間發(fā)現(xiàn)聚團(tuán)了怎么辦,？

3,、使用的培養(yǎng)瓶是否需要特殊處理或者采用一些特殊的培養(yǎng)瓶呢？

想必這些是大家經(jīng)常遇到的問題吧,，那么下面我們就為大家一一解答這些疑問,，處理大家經(jīng)常遇到的問題吧。

該細(xì)胞自身生長速度是屬于比較緩慢的一種類型,，具體倍增時(shí)間大約在60多個(gè)小時(shí)左右,，這些是我們實(shí)驗(yàn)人員難以干預(yù)的因素，另外該細(xì)胞在培養(yǎng)的時(shí)候會(huì)引起培養(yǎng)基ph值明顯變化,，因此及時(shí)更換培養(yǎng)液是必須做的選擇之一,。我們能做到的是處理該細(xì)胞的時(shí)候，注意提高相應(yīng)的凍存量（比如2個(gè)長滿的T25培養(yǎng)瓶凍存3株作為備用）,，此外凍存液也要稍微多300ul左右,，提高存活率。另一點(diǎn),，根據(jù)該細(xì)胞的培養(yǎng)條件入手了,，該細(xì)胞經(jīng)常使用的培養(yǎng)條件是：RPMI-1640（品牌：中喬新舟 貨號(hào)：ZQ-200）+10%FBS（品牌：中喬新舟 貨號(hào): AU0600）+1%PS（貨號(hào)：CSP006）+1%L-alanyl-L-glutamine（品牌：中喬新舟  貨號(hào)：CSP004）+%SP（品牌：中喬新舟  貨號(hào)：CSP003），推薦*培養(yǎng)基（品牌：中喬新舟 貨號(hào):ZQ-221）我們實(shí)驗(yàn)室長期的培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),，該細(xì)胞在20%的血清濃度下,，生長速度相比較10%有所提升，且此方法也被一些大廠培養(yǎng)機(jī)構(gòu)所使用,，對(duì)實(shí)驗(yàn)時(shí)間有要求的小伙伴來說是比較好的一個(gè)方法,。

如圖一所示可以看出細(xì)胞出現(xiàn)明顯聚團(tuán)嚴(yán)重的現(xiàn)象，遇到這樣情況我們?cè)撊绾闻囵B(yǎng)出圖二這么好看的細(xì)胞呢,？

我們建議針對(duì)消化處理和培養(yǎng)器皿的選擇兩方面來優(yōu)化,，接下來分享一下我們實(shí)驗(yàn)室的一些小技巧,，幫助大家更好的處理這個(gè)細(xì)胞。首先這株細(xì)胞并不形成一致的單層,，而是形成集落,，這也是此細(xì)胞為何總是出現(xiàn)這個(gè)現(xiàn)象的一個(gè)原因，因此我們才會(huì)想到從細(xì)胞消化及培養(yǎng)器皿的處理,、選擇上去解決這個(gè)問題,。

在消化處理的時(shí)候，我們選用的胰酶濃度是0.25%,，棄去上清培養(yǎng)液后,，在瓶內(nèi)添加1ml左右0.25%的胰酶，讓它覆蓋T25瓶底,，迅速吸出丟棄,，然后再添加1ml的胰酶，放入到培養(yǎng)箱中消化,，此時(shí)每2min拿出細(xì)胞鏡下觀察,，輕輕拍打瓶底如果多數(shù)細(xì)胞呈流沙狀，然后添加終止液,，用巴氏管在瓶底輕輕吹打細(xì)胞懸液,，目的是把細(xì)胞吹散，不要出現(xiàn)團(tuán)塊即可進(jìn)行下一步的傳代或者凍存等操作,。

關(guān)于器皿的選擇,，我們實(shí)驗(yàn)室前期使用的是Corning的Cellbind培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，但后面經(jīng)過長期的對(duì)比培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)采用我公多聚賴氨酸包被液（貨號(hào)：0413）包被過的T25培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞,，形態(tài)及狀態(tài)更佳，更不容易出現(xiàn)細(xì)胞聚團(tuán)的現(xiàn)象,。

以上就是lncap細(xì)胞培養(yǎng)的一些小技巧,，大家get到了嗎？

細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng)

1,、整個(gè)復(fù)蘇過程要盡量快,，溶解時(shí)間太長可能影響復(fù)蘇效果；

2,、已溶解的凍存細(xì)胞盡量短時(shí)間的在常溫存放,，盡快稀釋或者離心去除DMSO；

3,、由于“化冰"這一步里凍存管與水溫差太大,，尤其是液氮里拿出來的凍存管，放到水里可能會(huì)造成翻江倒海的既視感,，所以可以用鑷子夾住凍存管往水里摁,，這樣即使有炸裂的情況也會(huì)有水做緩沖,；

4、取凍存管時(shí)要謹(jǐn)防凍傷,，尤其是夏天,，盡管熱也最好穿長袖白大褂；

5,、離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進(jìn)行,，也就是直接把凍存管離心，離心后棄去原來的凍存液,，然后直接加*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，接著把細(xì)胞轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿/瓶里培養(yǎng)。這種方法也許不能將DMSO清除得很干凈,，但是基本影響不大,；

6、復(fù)蘇第二天記得去看看細(xì)胞,，如果狀態(tài)還不錯(cuò)的話就說明復(fù)蘇成功,。