在正相色譜中，一般采用極性鍵合固定相,，硅膠表面鍵合的是極性的有機(jī)基團(tuán),，鍵合相的名稱由鍵合上去的基團(tuán)而定。常用的有氰基(-CN),、氨基(-NH2),、二醇基(DIOL)鍵合相。流動(dòng)相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機(jī)溶劑,，如烴類溶劑,，或其中加入一定量的極性溶劑(如氯仿、醇,、乙腈等),，以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度。通常用于分離極性化合物,。一般認(rèn)為正相色譜的分離機(jī)制屬于分配色譜,。組分的分配比K值，隨其極性的增加而增大,，但隨流動(dòng)相中極性調(diào)節(jié)劑的極性增大(或濃度增大)而降低,。同時(shí)，極性鍵合相的極性越大,，組分的保留值越大,。該法主要用于分離異構(gòu)體，極性不同的化合物,，特別是用來分離不同類型的化合物,。
在反相色譜中，一般采用非極性鍵合固定相,，如硅膠-C18H37(簡稱ODS或C18)硅膠-苯基等,，用強(qiáng)極性的溶劑為流動(dòng)相，如甲醇/水,，乙腈/水,，水和無機(jī)鹽的緩沖液等。
正相色譜和反相色譜的區(qū)別：
本質(zhì)上是填料(固定相)的不同,正相色譜柱填料極性強(qiáng),洗脫順序由弱到強(qiáng);反相色譜柱填料極性弱,，洗脫順序由強(qiáng)到弱,。
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠以及其他具有極性官能團(tuán)胺基團(tuán),，如(NH2,，APS)和氰基團(tuán)(CN，CPS)的鍵合相填料,。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他極性基團(tuán)極性較強(qiáng),，因此,，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱,。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對比固定相低,，如正已烷，氯仿,，二氯甲烷等,。
2、反相色譜
反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì),，表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相,。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水,、緩沖液與甲醇,、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出,，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。
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