抗酸染色法acid-fast staining method 1882年由埃利希(F.Ehrlich),,并經(jīng)F.齊爾(Ziehl)改進而創(chuàng)造出的細菌染色法。
其中代表性的為對結(jié)核菌的齊爾-尼爾森(Ziehl-Neelsen)染色法和齊爾-加貝特(Ziehl-Gabbet)染色法,。用石炭酸復紅染色后,,用鹽酸乙醇分色,,再用美藍進行對比染色,即不再脫色而呈現(xiàn)石炭酸復紅的紅色,。
抗酸染色的原理:
分枝桿菌的細胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì),,包圍在肽聚糖的外面,所以分枝桿菌一般不易著色,,要經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使其著色,。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后,就很難被酸性脫色劑脫色,,故名抗酸染色,。齊-尼氏
抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復紅牢固結(jié)合成復合物,用鹽酸酒精處理也不脫色,。當再加堿性美蘭復染后,,分枝桿菌仍然為紅色,而其他細菌及背景中的物質(zhì)為藍色,。
抗酸染色一般步驟
1)初染
用玻片夾夾持涂片標本,,滴加石炭酸復紅2-3滴,在火焰高處徐徐加熱,,切勿沸騰,,出現(xiàn)蒸汽即暫時離開,若染液蒸發(fā)減少,,應再加染液,,以免干涸,加熱3-5分鐘,,待標本冷卻后用水沖洗。
2)脫色
3%鹽酸酒精脫色30秒~1分鐘,;用水沖洗,。
3)復染
用堿性美蘭溶液復染1分鐘,水洗,,用吸水紙吸干后用油鏡觀察,。
抗酸染色的染液配制
1、石炭酸復紅
堿性復紅酒精飽和溶液 10mL
5%石炭酸 90mL
2,、3%鹽酸酒精
濃鹽酸 3mL
95%酒精 97mL
3,、呂氏美蘭液
美蘭酒精飽和液 30mL
氫氧化鉀(1:10000) 100mL
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