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堿性磷酸酶染色,又稱Alp染色,，是用于檢測骨細(xì)胞,、骨組織、腎,、肝堿性磷酸酶的染色方法,，使堿性磷酸酶呈黑色，細(xì)胞核呈淺藍(lán)色,，這是成熟成骨細(xì)胞的標(biāo)志性酶;也可用于肝炎和腎炎的檢測,。
堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)流程
(1)樣本接收：石蠟切片,、細(xì)胞爬片、冰凍切片
(2)實(shí)驗(yàn)步驟：脫蠟至水—染液配制-Alp染色-蘇木素淺染核
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：染色好的玻片
alp堿性磷酸酶染色服務(wù)注意事項(xiàng)
1,、注意染液要現(xiàn)配現(xiàn)用,。
2、注意切片要用超純水水洗,。
TRAP染色是用于檢測骨組織,、骨細(xì)胞中特征物質(zhì)的染色,使破骨細(xì)胞呈紅色,背景呈綠色或藍(lán)色?？咕剖崴嵝粤姿崦?Trap)為破骨細(xì)胞的標(biāo)志酶,特異地分布于破骨細(xì)胞中,為破骨細(xì)胞所*,通常作為鑒別破骨細(xì)胞的重要標(biāo)志物,。
TRAP染色服務(wù)內(nèi)容
1、石蠟切片4~5um,，脫蠟至水洗,；細(xì)胞爬片或者冰凍切片用80%酒精固定后蒸餾水水洗3次，每次3分鐘,。
2,、配制六偶氮副品紅溶液
3、配制孵育液：取1ml六偶氨副品紅加到18ml醋酸鹽溶中,，再加入1ml紫酚ASBI磷酸鹽溶液,，再加酒石酸鉀鈉 282mg。調(diào)pH值5.0,，過濾備用,；
4、陰性對照孵育液：取1ml六偶氨副品紅加到18ml醋酸鹽溶中,，再加酒石酸鉀鈉282mg,。調(diào)pH值5.0，過濾備用
5,、切片入37℃蒸餾水水洗30秒,；
6、入孵育液37℃孵育50-60分鐘,；
7,、去離子水水洗3分鐘；8,、入蘇木素復(fù)染40秒,；
9、自來水水洗10分鐘返藍(lán),；
10,、甘油明膠封片
alp堿性磷酸酶染色服務(wù)原理
人血液和造血細(xì)胞的堿性磷酸酶pH值為9.4，主要見于中性粒細(xì)胞系的成熟階段或晚幼粒細(xì)胞,。在不同生理狀態(tài)和病理狀態(tài)中均有明顯的改變,，具有鑒別診斷意義,。
方法
目前堿性磷酸酶染色法有改良Gomori法及偶氮偶聯(lián)法 (Kaplow)。
改良Gomori法原理為： 細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶水解試劑中的甘油磷酸鈉釋放出無機(jī)磷酸鹽,，與鈣離子作用生成磷酸鈣,，再與鈷離子作用生成磷酸鈷，后與硫化銨生成黑色硫化鈷顆粒,，沉淀于細(xì)胞漿中,。
偶氮偶聯(lián)法原理為：細(xì)胞中堿性磷酸酶在pH 9.5～9.8的緩沖液中，催化α-磷酸萘酚偶聯(lián)成不溶性有色偶氮染料沉淀于細(xì)胞漿中,。
結(jié)果解讀
ALP活性僅見于成熟或接近成熟的中性粒細(xì)胞,。計(jì)數(shù)100個中性粒細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)，稱陽性率,。還可按陽性細(xì)胞中的顆粒密度分為1～5級，指數(shù)各為1～5,。計(jì)算100個中性粒細(xì)胞,，將每個細(xì)胞的指數(shù)相加，其總和稱陽性指數(shù)或積分,，作為判斷酶活性的半定量的指標(biāo),。由于方法及條件的不同，正常差別很大,，故每次檢查時應(yīng)作正常對照,。本法的正常值陽性率為60～99%，陽性指數(shù)169～367,，平均為274,。
