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詳細(xì)介紹
豬骨髓間充質(zhì)干原代細(xì)胞
豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞,、血小板和各種白細(xì)胞,。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細(xì)菌,、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長(zhǎng)骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓,。出生時(shí),，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大,，脂肪細(xì)胞增多,，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的,、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞，可以向骨,、軟骨,、肌組織、皮膚,、脂肪,、等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞,。在骨髓中,，BMSC占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%-0.1%，含量極低,。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高,，在培養(yǎng)過程中，受貼壁時(shí)間、種植密度,、血清含量,、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。
英文名稱 | Porcine Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells | 組織來源 | 骨髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7031 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
組織來源：骨髓
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的豬骨髓間充質(zhì)干采用沖洗骨髓,、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的豬骨髓間充質(zhì)干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
人羊膜細(xì)胞;WISH | 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7抗體 |
成對(duì)螺旋細(xì)絲蛋白抗體 | 2號(hào)染色體開放閱讀框15抗體 |
表皮生長(zhǎng)因子受體底物8抗體 | 2號(hào)染色體開放閱讀框6抗體 |
間隙連接蛋白40抗體 | DDRGK1蛋白抗體 |
9號(hào)染色體開放閱讀框62抗體 | 發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-5抗體 |
TNFRSF4 Others Mouse 小鼠 TNFRSF4 / OX40 / CD134 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | BACE1 Others Human 人 BACE1 / ASP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
羅猴胎腎細(xì)胞;MA104 | CALCB Others Human 人 CALCB / CGPR / Calcitonin 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
NHEK adult pooled Pellet 正常人類表皮角質(zhì)細(xì)胞團(tuán)塊(捐獻(xiàn)者,，混合來源) > 1 mio.cells 雪旺細(xì)胞培養(yǎng)基SCM | CD40LG Others Canine 狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
RSV-G Others Respiratory syncytial virus/RSV 人類呼吸道合胞病毒 hRSV (B1) glycoprotein G / RSV-G 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | FLT4 Others Human 人 VEGFR3 / FLT4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CL-0422RBL-1(大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 豬骨髓間充質(zhì)干原代細(xì)胞2號(hào)染色體開放閱讀框6抗體 |
HS 683(人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 生孢梭菌 | 小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Fox-NY |
轉(zhuǎn)PYTL基因小鼠支持細(xì)胞;15P-1 | T24-EGFP(CMV-EGFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人膀胱癌細(xì)胞 T24-EGFP (CMV-EGFP leiviral consuct stable sain) of human bladder cancer cells 1640+10% FBS |
CCL24 Others Human 人 CCL24 / Eotaxin-2 / MPIF-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 9號(hào)染色體開放閱讀框46抗體 |
BTB-kelch蛋白家族10抗體 | Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-L1 |
G1氨基A型受體相似蛋白2抗體 | 核基質(zhì)蛋白22 |
腸高血糖素相關(guān)肽抗體 | TNFRSF4 Others Mouse 小鼠 TNFRSF4 / OX40 / CD134 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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