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本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠牙周膜成纖維采用膠原酶-聯(lián)合消化法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠牙周膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠牙周膜成纖維原代細胞 | 組織來源 | 牙周膜組織 |
英文名稱 | Mouse Periodontal Ligament Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7594 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠牙周膜成纖維細胞分離自牙周膜組織,；牙周膜（牙周韌帶,、牙周間隙）是由致密結(jié)締組織所構(gòu)成。多數(shù)纖維排列成束,，纖維的一端埋于牙骨質(zhì)內(nèi),，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內(nèi),；牙周膜內(nèi)有,、血管、淋巴和上皮細胞等,。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的牙周膜成纖維細胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細胞質(zhì)透明,，細胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。牙周膜成纖維細胞（PLFs）作為牙周膜的主體細胞,，是牙周膜主要的間質(zhì)細胞，它不僅具有合成膠原,、基質(zhì),、彈力纖維和糖蛋白的功能，還有吸收膠原吞噬異物的能力,，還參與了牙周組織的病變,、修復(fù)及再生過程。現(xiàn)在,，利用牙周膜細胞建立體外模型,，已經(jīng)成為有關(guān)員研究牙周組織疾病的重要手段。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
95-D細胞,，人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞 轉(zhuǎn)血小板基因倉鼠卵巢細胞,CHO-pt細胞 CM-M018小鼠頜下腺上皮細胞培養(yǎng)基100mL | 核受體輔助抑制因子1抗體 |
T淋巴細胞負調(diào)節(jié)蛋白抗體 | 細胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體 |
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體 | 電壓門控通道5α抗體 |
元特異性烯醇化酶/γ 烯醇化酶抗體 | 親核素β1抗體 |
溴脫氧尿苷單克隆抗體（增殖標志物） | 甲狀腺過氧化物酶抗體 |
SCaBER(人膀胱鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 | 小鼠癌細胞;CCC-Ca761-03 |
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA 淋巴瘤細胞,，P388D1細胞 IF細胞，兔成骨C細胞 | 人胚腎細胞;293 [HEK-293] |
原代膠質(zhì)細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/250/100ml | NCI-H1703(人肺鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
犬腎細胞系/IgR;MDCK/IgR | 人間充質(zhì)干細胞(肝臟)cDNAHMSC-hp cDNA |
6T-CEM細胞,，人T細胞白血病細胞 綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞,U14-GFP細胞 前脂肪細胞分化培養(yǎng)基PADM-prf | 小鼠牙周膜成纖維原代細胞電壓門控通道5α抗體 |
HBMEC 人腦微血管內(nèi)皮細胞 | SW480(人結(jié)腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H3N2 (A/Aichi/2/1968) 酶 (Neuraminidase / NA) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CD84 Others Mouse 小鼠 CD84 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-R033大鼠肝實質(zhì)細胞培養(yǎng)基100mL |
TGFA Protein Human 重組人 TGFA / TGF-alpha 蛋白 | 糖原合酶激酶-3β抗體 |
鈣連蛋白抗體 | CRT 膠質(zhì)瘤細胞 |
原鈣粘蛋白γC4抗體 | 表皮細胞表面抗原1抗體 |
類白細胞抗原G抗體（C端） | SCaBER(人膀胱鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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