小鼠嗅鞘原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代牙乳頭細(xì)胞 人導(dǎo)管癌細(xì)胞 英文 BT474 TSHS4 樹鼩皮膚成纖維樣細(xì)胞 1ml/T75 Hep-2, 人喉癌細(xì)胞系 Human RL1 大鼠肺成纖維樣細(xì)胞 大鼠原代肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

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細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠嗅鞘采用-膠原酶聯(lián)合消化法,、結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠嗅鞘經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠嗅鞘細(xì)胞分離自嗅球組織；嗅鞘細(xì)胞（OECs）是在功能上介于施旺細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細(xì)胞,，具有營(yíng)養(yǎng),、抑制膠質(zhì)增生、瘢痕形成,、成鞘作用等,；為軸突生長(zhǎng)提供了適宜的微環(huán)境及較強(qiáng)的遷移的特性，使其成為促進(jìn)中樞再生的理想候選細(xì)胞之一,。嗅鞘細(xì)胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞系統(tǒng)可以再生細(xì)胞之一,，其特點(diǎn)為終身具有再生功能，還能夠釋放多種營(yíng)養(yǎng)因子,、粘附分子,。被認(rèn)為是髓鞘化能力強(qiáng)的膠質(zhì)細(xì)胞，逐漸用于治療脊髓損傷,。嗅鞘細(xì)胞與膠質(zhì)細(xì)胞,、雪旺細(xì)胞在表現(xiàn)型上有共同點(diǎn)，它們都能促進(jìn)軸突的再生,，主要區(qū)別在于嗅鞘細(xì)胞不但存在于中樞系統(tǒng),，也存在于外周中。嗅鞘細(xì)胞被認(rèn)為是一種可塑性很高的細(xì)胞,，它可表現(xiàn)出多種細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)志,，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中，嗅鞘細(xì)胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型,，其中P75NTR,、GFAP,、和O4可標(biāo)記大部分在體嗅鞘細(xì)胞，然而在嗅球外層O4陽(yáng)性嗅鞘細(xì)胞仍然可以在P75NTR陽(yáng)性細(xì)胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽(yáng)性的細(xì)胞層,，還有一定比率的嗅鞘細(xì)胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽(yáng)性,。嗅黏膜中的元是生后才生長(zhǎng)并在成年時(shí)繼續(xù)分化的元，壽命為4-12周,，隨著新細(xì)胞的生長(zhǎng),，又建立了新的支配關(guān)系。嗅鞘細(xì)胞存在于嗅及嗅球的層上,，沿嗅的全長(zhǎng),，從周圍系統(tǒng)到中樞分布。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 元細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。

公司產(chǎn)品：

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。

11. 鏡檢觀察,。