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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胃黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胃黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠胃黏膜上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 胃組織 |
英文名稱 | Mouse Gastric Mucosal Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7157 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠胃黏膜上皮細(xì)胞分離自胃黏膜組織；胃黏膜柔軟,，活體呈橘紅色,。胃空虛時(shí)形成許多皺襞,，充盈時(shí)變平坦,。幽門處的黏膜形成環(huán)形皺襞，突向腔內(nèi)稱幽門瓣,。胃黏膜可分為三層,，即上皮層（單層柱狀上皮）,、固有層（由結(jié)締組織構(gòu)成、含有大量的胃腺）和黏膜肌層（為薄層平滑肌,、排列成內(nèi)環(huán)外縱）,。胃黏膜上皮細(xì)胞源自胃黏膜的上皮層，細(xì)胞為單層柱狀上皮,，排列整齊,，能分泌黏液覆蓋于胃黏膜的表面，防止胃酸和對(duì)胃黏膜的損害,。體外培養(yǎng)胃黏膜上皮細(xì)胞為研究細(xì)胞功能及致病因子,、藥物、激素對(duì)細(xì)胞的損傷,、保護(hù)和功能調(diào)控提供了簡(jiǎn)單而的模型,。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
人支氣管平滑肌細(xì)胞總RNAHBSMC NA | 白介素2抗體 |
腫瘤抑制基因野生型P53單抗 | 20號(hào)染色體開放閱讀框74抗體 |
外胚層發(fā)育不良抗體 | 肌球蛋白XVIIIb抗體 |
緊密連接蛋白14抗體 | 跨膜TMIGD1蛋白抗體 |
酸化酪蛋白激酶casein kinase Iα抗體 | 硫酸乙酰肝素蛋白多糖2 |
小鼠雪旺細(xì)胞(MSC)(5×105) | EFNA3 Others Human 人 EphrinA3 / EFNA3 / EFL2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
牛胚氣管細(xì)胞;EB (NBL-4) | FGFBP3 Others Human 人 FGFBP3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
IL6R Others Human 人 IL6R / CD126 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | HA Others H6N4 甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
表達(dá)SV40T和EBNA1的人胚腎細(xì)胞;293ET 人腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 L6(大鼠成肌細(xì)胞) |
CM-H028人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠胃黏膜上皮原代細(xì)胞肌球蛋白XVIIIb抗體 |
K-562(人慢性骨髓性白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 COLEC10 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 新生兒表皮角化細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
CD40LG Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) | 恒河猴胚腎細(xì)胞;FRhK-4 [FRhK4] 組織細(xì)胞淋巴瘤，U937細(xì)胞 A-673(橫紋肌瘤細(xì)胞) |
12. 骨骼細(xì)胞系統(tǒng) | 4號(hào)染色體開放閱讀框19抗體 |
酸化電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體 | EFNA3 Others Human 人 EphrinA3 / EFNA3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
抗3抗體 | 蛋白激酶C結(jié)合蛋白NELL2抗體 |
20號(hào)染色體開放閱讀框100抗體 | 小鼠雪旺細(xì)胞(MSC)(5×105) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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