小鼠腎動脈內(nèi)皮原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞 NCTC 1469(小鼠正常肝細(xì)胞) LTEP-s 人肺鱗癌細(xì)胞 1ml/T75 GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤 Rattus GPS5 豚鼠皮膚成纖維樣細(xì)胞 大鼠原代食管平滑肌細(xì)胞

小鼠腎動脈內(nèi)皮原代細(xì)胞

小鼠腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎組織,；腎臟是機(jī)體的重要器官,，它的基本功能是生成尿液,，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物,、毒物,，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖,、蛋白質(zhì),、氨基酸、鈉離子,、鉀離子,、等，以調(diào)節(jié)水,、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡,。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素,、促紅細(xì)胞生成素,、活性D3、前列腺素,、激肽等,，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進(jìn)行,。腎動脈的分支為葉間動脈，穿行于腎柱內(nèi),，上行至皮質(zhì)與髓質(zhì)交界處,，形成與腎表面平行的弓狀動脈。小葉間動脈向被膜發(fā)出毛細(xì)血管,，并向周圍的腎小體發(fā)出入球小動脈,，進(jìn)入腎小囊后形成球形的毛細(xì)血管網(wǎng)，再匯集成出球小動脈,，出腎小體,。直小動脈分支形成毛細(xì)血管網(wǎng)，再匯合成直小靜脈,，入弓狀靜脈,、葉間靜脈，后匯合成腎靜脈經(jīng)腎門出腎,，注入下腔靜脈,。腎動脈既是腎的營養(yǎng)血管，又是腎的機(jī)能血管,，與腎泌尿機(jī)能密切相關(guān),。腎動脈在腎實(shí)質(zhì)內(nèi)形成兩個毛細(xì)血管網(wǎng)：腎小球毛細(xì)血管網(wǎng)，血壓較高,，利于血漿濾過形成原尿,；球后毛細(xì)血管網(wǎng)，血壓較低,，利于腎小管的重吸收,。腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞是腎動脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用,。腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①在血漿濾過形成原尿的過程中起重要作用,，②在腎小管的重吸收過程中起重要作用，③保持凝血和纖溶的動態(tài)平衡,。

產(chǎn)品名稱：小鼠腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞

組織來源：腎組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

方法簡介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎動脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎動脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。