小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體原代細胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代冠狀動脈成纖維細胞 NCI-H446(人小細胞肺癌細胞) H1299 人肺癌細胞 1ml/T75 U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細胞 Human RWPE-1 人正常前列腺上皮細胞 大鼠原代外周血白細胞

小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體原代細胞

小鼠少突膠質(zhì)前體細胞分離自腦皮層組織,；大腦分左右兩個半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個大腦半球的大部分,，它是元胞體集中的地方,。內(nèi)部則是由纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細胞分布于中樞系統(tǒng),，在銀浸染標(biāo)本中,，少突膠質(zhì)細胞比星狀膠質(zhì)細胞小,，其突起也較小而少，呈珠狀,，故被稱為少突膠質(zhì)細胞或寡突膠質(zhì)細胞,。少突膠質(zhì)細胞（oligodendrocyte）是中樞系統(tǒng)（CNS）的成髓鞘膠質(zhì)細胞，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細胞祖細胞,、前少突膠質(zhì)細胞祖細胞,、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型,。但是,，細胞發(fā)育是一個連續(xù)的過程，其形態(tài),、表達產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴(yán)格的界限,，因此，其分類是相對的,。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）,。細胞呈圓形，表面光滑,，直徑約3μm,，體外混合培養(yǎng)時成簇生長在星形膠質(zhì)表面，具有很強的分裂增殖潛力,，表達節(jié)苷脂GM1,、波形蛋白和多唾液酸—粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等,。Ⅱ型少突膠質(zhì)細胞胞體常有雙極或三極突起,，極少數(shù)為單極突起，直徑約7μm,，有一定的分裂增殖能力,。體外培養(yǎng)時為雙潛能細胞，既可分化為少突膠質(zhì)細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì),，故又稱為少突膠質(zhì)細胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,，O2A）。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達節(jié)苷脂GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體）,，故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A,。Ⅲ型少突膠質(zhì)細胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細胞,。直徑約10μm,。根據(jù)其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細胞,。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起,，表面還殘留有A2B5標(biāo)記物,，同時也表達O1-O4抗原，無形成髓鞘的能力,。成熟的少突膠質(zhì)細胞突起有如蜘蛛網(wǎng),，大量表達半乳糖腦苷脂（galactocerebro side，GC）,、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein,，PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein,，MBP）等,，有對軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細胞前體細胞（簡稱少突膠質(zhì)細胞前體細胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細胞,，前兩者具有增殖能力,。

產(chǎn)品名稱：小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細胞

組織來源：腦組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement,、PDGF,、bFGF、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2天半量換液1次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 雙極,、多極形

傳代特性 不傳代，不增值,，存活1-2周

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%

方法簡介

公司實驗室分離的小鼠少突膠質(zhì)采用消化,、混合細胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng),、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×105cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠少突膠質(zhì)前體經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2,、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

 

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。