小鼠三叉神經(jīng)元原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：大鼠原代骨細(xì)胞 NCI-H2452(人間皮瘤細(xì)胞) H-125 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 1ml/T75 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 Chang liver 人張氏肝細(xì)胞 大鼠原代外周血淋巴細(xì)胞

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：

方法簡(jiǎn)介

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠三叉元采用消化法結(jié)合元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠三叉元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠三叉元細(xì)胞分離自三叉組織,；三叉為粗大的混合性腦，含一般軀體感覺(jué)和特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)兩種纖維,。其特殊內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)纖維起于腦橋中段的三叉運(yùn)動(dòng)核,，纖維組成三叉運(yùn)動(dòng)根，由腦橋基底部與腦橋臂交界處出腦,，位于感覺(jué)根下內(nèi)側(cè),，后進(jìn)入三叉第3支下頜中，經(jīng)卵圓孔出顱,，隨下頜分支分布于咀嚼肌等,。運(yùn)動(dòng)根內(nèi)還含有三叉中腦核有關(guān)的纖維，主要傳導(dǎo)咀嚼肌的本體感覺(jué),。三叉內(nèi)以軀體感覺(jué)纖維為主,，這些纖維的細(xì)胞體位于三叉節(jié)（半月節(jié)）內(nèi)，該節(jié)位于顱中窩顴骨巖部的前面三叉壓跡處,，為硬腦膜形成的美克爾腔包裹,。三叉節(jié)由假單極元組成，其中樞突集中構(gòu)成了粗大的三叉感覺(jué)根,，由腦橋基底部與腦橋臂交界處入腦,，止于三叉諸感覺(jué)核，其中傳導(dǎo)痛溫覺(jué)的纖維主要終止于三叉脊束核,；傳導(dǎo)觸覺(jué)的纖維主要終止于三叉腦橋核。三叉節(jié)細(xì)胞的周圍突組成三叉三大分支,，即第1支眼,、第2支上頜、第3支為下頜。從3大分支不斷分支分布于面部皮膚,、眼及眶內(nèi),、口腔、鼻腔,、鼻旁竇的粘膜,、牙、腦膜等,，傳導(dǎo)痛,、溫、觸等多種感覺(jué),。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 元細(xì)胞樣

傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

操作步驟：

1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。

10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：