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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠軟骨采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠軟骨原代細(xì)胞 | 組織來源 | 軟骨組織 |
英文名稱 | Mouse Chondrocyte Cells | 貨號(hào) | YS-01X7304 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠軟骨細(xì)胞分離自軟骨組織,；軟骨組織由軟骨細(xì)胞,、基質(zhì)及纖維構(gòu)成。軟骨組織再生能力強(qiáng),，這些增生的幼稚細(xì)胞形似纖維母細(xì)胞,，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣?xì)胞，并形成軟骨基質(zhì),，細(xì)胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細(xì)胞,。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨,、彈性軟骨和纖維軟骨三種,，其中以透明軟骨的分布較廣，結(jié)構(gòu)也較典型,。軟骨細(xì)胞（chondrocyte）位于軟骨陷窩內(nèi),。幼稚的軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層，單個(gè)分布,，體積較小，呈橢圓形,，長(zhǎng)軸與軟骨表面平行,，越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形,，染色淺,，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi),，這些軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群,。電鏡下,，軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體,。在組織切片中,，軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形,，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
山羊腎上皮樣細(xì)胞;DG-K1 | 囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體 |
早幼粒細(xì)胞白血病鋅指蛋白抗體 | 中心體肌動(dòng)蛋白γ1/增強(qiáng)型PI3K蛋白抗體 |
真核啟動(dòng)因子2α抗體(eIFα2) | 酪單氧化酶微管相關(guān)蛋白MICAL抗體 |
嗜粒細(xì)胞抗原CD177抗體 | 雙特異性酸酶2抗體 |
嘧啶CYP3A抗體 | 流感病毒H3N2血凝素抗體 |
CDC37 Others Mouse 小鼠 CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CLEC4A Others Human 人 DCIR / CLEC4A / CLECSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
破骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | FCGR2 Others Mouse 小鼠 CD32 / FCGR2B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
GFRA1 Others Human 人 GFRA1 / GFRα1 / GDNFRA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | CGB5 Others Human 人 CGB5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CEACAM3 Others Human 人 CEACAM3 / CD66D 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | T47D細(xì)胞，人管癌細(xì)胞 豬腎細(xì)胞系,IBRS-2細(xì)胞 肺成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) |
CM-H077人心室肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠軟骨原代細(xì)胞酪單氧化酶微管相關(guān)蛋白MICAL抗體 |
CNE細(xì)胞,，人鼻咽癌細(xì)胞 鼠骨髓瘤細(xì)胞,SP2/0-Ag14細(xì)胞 恒河猴皮膚細(xì)胞;RM-S1 | 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHBMEC NA |
3T6 Swiss albion小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 | IL22RA1 Others Canine 狗 IL22RA1 / IL22R 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
FOLR1 Others Human 人 FOLR1 / Folate receptor alpha 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 環(huán)核苷酸門控陽離子通道蛋白CNG-1β抗體 |
纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子7抗體 | SW-13細(xì)胞,，腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞 黑色素瘤,Bowes Melanoma細(xì)胞 人肺癌細(xì)胞;A549 [A-549] |
大腦蛋白2抗體 | 鼻咽癌相關(guān)蛋白6抗體 |
節(jié)苷脂誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白1抗體 | CDC37 Others Mouse 小鼠 CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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