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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠前脂肪采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠前脂肪經(jīng)油紅O染色檢測,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠前脂肪原代細(xì)胞 | 組織來源 | 脂肪組織 |
英文名稱 | Mouse Preadipocyte Cells | 貨號(hào) | YS-01X7312 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
小鼠前脂肪細(xì)胞分離自脂肪組織,；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成,，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪,，在需要時(shí)可迅速分解成甘油和脂肪酸,，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性,、血壓水平,、內(nèi)皮功能、纖溶活動(dòng)及炎癥反應(yīng),，參與多種重要病理生理過程,；脂肪組織已由過去單純作為能量儲(chǔ)存的器官而成為一個(gè)極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪組織在體內(nèi)含有兩種主要的細(xì)胞：一種是在胞漿內(nèi)積聚脂滴的成熟脂肪細(xì)胞,；另一種是雖未在胞漿內(nèi)積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細(xì)胞,。前脂肪細(xì)胞呈梭形，有分裂和增殖的能力,；成熟的脂肪細(xì)胞呈圓形,，已經(jīng)失去了分裂及增殖的能力。由于前脂肪細(xì)胞是一類具有增殖和向脂肪細(xì)胞分化能力的特異化前體細(xì)胞,，與肥胖有著非常密切的關(guān)系,。前脂肪細(xì)胞是一種類成纖維細(xì)胞，在演變的過程中不斷吸收脂質(zhì),，終成為成熟的脂肪細(xì)胞,。前脂肪細(xì)胞對外界機(jī)械損傷的抵抗力較強(qiáng)，可望成為軟組織缺損的有益填充物,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
公司產(chǎn)品：
上皮細(xì)胞cDNAHMEpiC cDNA | 胰島素基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白1抗體 |
Rho相關(guān)結(jié)構(gòu)域BTB蛋白質(zhì)1抗體 | 半胺酸蛋白酶-2抗體 |
抗志賀毒素大腸桿菌O139抗體（仔豬水腫病志賀毒素大腸桿菌O139） | 肌管素相關(guān)蛋白2抗體 |
1號(hào)染色體開放閱讀框145抗體 | 腦表皮生長因子跨膜蛋白DNER抗體 |
嘧啶cP4501B1抗體 | 瘤病毒16型L2抗體 |
PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HFF-1(人成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 克雷伯肺炎桿菌 |
臍帶單核細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人系統(tǒng)周邊細(xì)胞 (HPNC)( 5×105 ) 小鼠海馬膠質(zhì)細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) Mouse | IFNA2 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNA2 / Ierferon alpha 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HPX Others Mouse 小鼠 HPX / Hemopexin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | FAM171B Others Human 人 FAM171B / KIAA1946 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-H081人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠前脂肪原代細(xì)胞肌管素相關(guān)蛋白2抗體 |
RSPO1 Others Human 人 RSPO1 / R-Spondin-1 (aa 1-146) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3 |
人腸平滑肌細(xì)胞RNAHISMC miRNA5 μg | CSF1R Others Human 人 M-CSFR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Ealy926細(xì)胞,，人腸系膜下腔動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 白色假絲酵母/白色念球菌 人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHPAEC NA | 補(bǔ)體C1qγ鏈多肽抗體 |
KBP蛋白抗體 | 人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素(HEM)( 5×105 ) |
酸化B-Raf抗體 | 元特異性蛋白家族成員2抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體115抗體 | PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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