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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骺軟骨采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化并軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骺軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠骺軟骨原代細(xì)胞 | 組織來源 | 生長板組織 |
英文名稱 | Mouse Epiphyseal Chondrocyte Cells | 貨號 | YS-01X7531 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
小鼠骺軟骨細(xì)胞分離自骨骺生長板,；骨骺生長板位于長骨兩端骨骺和骨干之間的軟骨組織,，其中的骺軟骨細(xì)胞可分裂、成熟,、肥大,，終被骨組織所替換，對于長骨生長具有重要作用,。幼稚的骺軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層,，單個分布,、體積較小、呈橢圓形,，長軸與軟骨表面平行,，越向深層的骺軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形,，染色淺,，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的骺軟骨細(xì)胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi),，這些骺軟骨細(xì)胞由同一個母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群,。電鏡下,，骺軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體,。在組織切片中,，骺軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的骺軟骨細(xì)胞對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
食管癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | 胰島素樣生長因子酸不穩(wěn)定亞基ALS抗體 |
血小板源性生長因子C抗體 | 毛細(xì)管形態(tài)發(fā)生蛋白1抗體 |
FAHD1蛋白抗體 | 乳腺上皮細(xì)胞抗原BA46抗體 |
嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL6抗體 | 雙皮質(zhì)素抗體 |
1號染色體開放閱讀框129抗體 | H5亞型全病毒抗體 |
GP140 Others HIV 人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 (group M, subtype CRF07_BC) gp140 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 人羊膜上皮細(xì)胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞 Mouse |
人癌細(xì)胞;MCF7 | 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HVVEC)( 5×105 ) |
hMNC-PB pooled Pellet 人類外周血單核細(xì)胞團(tuán)塊混合來源,，超 > 1 mio.cells 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞總RNAHUMSC NA | HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人腦瘤細(xì)胞;SF763 大鼠頜下腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | TNFRSF10A Others Human 人 TNFRSF10A / CD261 / APO2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-M034小鼠肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠骺軟骨原代細(xì)胞乳腺上皮細(xì)胞抗原BA46抗體 |
HuT 78(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 阪崎腸桿菌 | CL-0461UACC-812(人導(dǎo)管瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系 Mouse | C127小鼠細(xì)胞 C127 mouse mammary tumor cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS |
RNASET2 Others Human 人 RNASET2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 酸化細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 |
LRRC23蛋白抗體 | PDCD1LG2 Others Human 人 PD-L2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
酸化乳腺癌易感基因1抗體(人) | 腫瘤Nova1抗原抗體 |
GTP酶IMAP家族成員5抗體 | GP140 Others HIV 人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 (group M, subtype CRF07_BC) gp140 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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