化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠海綿體內皮采用混合酶消化法結合機械分離法,、并用內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
公司實驗室分離的小鼠海綿體內皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠海綿體內皮原代細胞 | 組織來源 | 海綿體組織 |
英文名稱 | Mouse Cavernous Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X7528 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠海綿體內皮細胞分離自海綿體組織,；陰莖海綿體是由海綿狀的小梁和腔隙構成的血竇結構,，它主要包括海綿體內皮細胞,、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質的膠原中,，而海綿體內皮細胞則覆蓋于海綿體血竇的腔面,，僅占海綿體組織的2.8%。在消化海綿體組織時,，膠原酶的作用主要是松解海綿體內皮細胞與基膜的聯(lián)系,，破壞海綿體內皮細胞間的緊密連接。如果消化時間延長或膠原酶濃度過大,，平滑肌細胞和成纖維細胞也將被消化下來,，從而影響海綿體內皮細胞的純度。因此,，比較篩選合適的膠原酶濃度和消化時間是成功分離海綿體內皮細胞的關鍵,。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品：
HLAmP細胞，人肺巨細胞癌細胞 大鼠巨噬細胞,MC細胞 CL-0058CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細胞)5×106cells/瓶×2 | 過氧化還原酶3抗體 |
RNA聚合酶II抗體 | 細胞角蛋白12抗體 |
0酯酶Cγ2抗體 | 蛋白酪酸酶CD148抗體 |
生長相關蛋白43 | 葡萄糖6-酸脫氨酶1抗體 |
鋅指蛋白909抗體 | 基質金屬蛋白酶9抗體 |
SW480(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 | MT-4 人急性淋巴母細胞白血病細胞 |
A-673 人橫紋肌瘤細胞 A-673 rhabdomyoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | TDGF1 Protein Human 重組人 Cripto / TDGF1 蛋白 (His 標簽) |
卵巢上皮細胞培養(yǎng)基OEpiCM | 豬細胞;ST |
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8 | IL1RN Protein Human 重組人 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 標簽) |
MRC-5細胞,，人正常胚肺成纖維細胞 人腎上腺母細胞瘤細胞(腦轉移),KP-N-NS細胞 人脈絡叢成纖維細胞HCPF | 小鼠海綿體內皮原代細胞蛋白酪酸酶CD148抗體 |
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-C | ITGA8 & ITGB1 Others Human 人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) |
Bel-7405細胞,，人肝癌細胞 逆轉錄病毒包裝用的人胚胎成纖維細胞,PA317細胞 敘利亞倉鼠腎細胞;BHK-21 | 小氣道上皮細胞培養(yǎng)基SAEpiCM-prf |
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-1D3 | 髓鞘相關糖蛋白-a抗體 |
細胞色素還原酶核心蛋白1抗體 | MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細胞 Human |
隱花色素蛋白2抗體 | 半胺酸蛋白酶蛋白-6抗體 |
跨膜蛋白2樣蛋白抗體 | SW480(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
化工儀器網(wǎng)