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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的小鼠骨髓成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的小鼠骨髓樹突狀細胞經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細 胞 形態(tài)等綜合鑒定,，純度可達80%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠骨髓樹突狀原代細胞(成熟DC細胞) | 組織來源 | 骨髓 |
英文名稱 | Mouse Bone Marrow Maturation Dendritic Cells | 貨號 | YS-01X7891 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠骨髓樹突狀細胞分離自骨髓,；骨髓是機體的造血組織,，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細胞,、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,，白細胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細菌、病毒等,；某些淋巴細胞能制造抗體,。因此，骨髓不但是造血器官,，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,，是一種海綿狀的組織,，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓,。出生時,，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大,，脂肪細胞增多,，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的,；樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長，在GM-CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,，細胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多,，亦可見少量短刺狀突,，胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強的遷移能力,，伴隨有部分未誘導成的單核細胞,，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα,、LPS等誘導而成,，多數(shù)呈懸浮生長， 細胞呈圓形,，細胞體積進一步增大,，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞,。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟,。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志，主要通過形態(tài)學,、組合性細胞表面標志,、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80,、CD86等共刺激分子,，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答,，處于啟動,、調(diào)控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié),；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應答,，不能激活T細胞的第二信號,，可導致T細胞無能，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細胞表面CD80,、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低，一般在30%以下,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細胞形態(tài)：圓形,，樹突狀
傳代特性：屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
小鼠骨髓樹突狀細胞(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
視網(wǎng)膜色素上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 白介素15抗體 |
軸周蛋白PRX抗體 | 皮膚T細胞淋巴瘤相關抗原5抗體（腦膜瘤表達抗原6） |
F-box蛋白2抗體 | 肌球蛋白輕鏈7抗體 |
CD44V5抗體 | DTX1抗體 |
1號染色體開放閱讀框156抗體 | 大鼠細小病毒H-1株(H-1)抗體（N端） |
DDR2 Others Human 人 DDR2 Kinase / CD167b 人細胞裂解液 (陽性對照) | HEC-1-B(人子宮內(nèi)膜腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0418QGY-7703(人肝癌細胞)5×106cells/瓶×2 散鱗鏡鯉尾鰭細胞;YZ21 |
人癌細胞;SK-BR-3 | CD59A Others Mouse 小鼠 CD59a / MAC-IP 人細胞裂解液 (陽性對照) |
hMNC-CB pooled Pellet 人類臍帶血單核細胞混合團塊,，超 > 1 mio.cells 人角膜上皮細胞總RNAHCEpiC NA | NP Others H5N1 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Nucleocapsid / NP 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
IL32 Others Human 人 Ierleukin-32 / IL-32 (isoform alpha) 人細胞裂解液 (陽性對照) | 豬胚胎傳代細胞;ST 子細胞,，SiHa細胞 B22細胞，KM小鼠未分化膠質(zhì)瘤瘤株 |
CM-M050小鼠卵巢顆粒細胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠骨髓樹突狀原代細胞(成熟DC細胞)肌球蛋白輕鏈7抗體 |
THP-1人單核白血病細胞 低分化結腸腺癌細胞,HCT-116細胞 SK-MES-1(肺鱗癌細胞) | 人毛細胞HHDPC |
L W-3A 小鼠皮下結締組織細胞 | SPARCL1 Others Mouse 小鼠 SPARCL1 / SPARC-like 1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人前列腺平滑肌細胞(HPSMC)(5×105) 細胞名稱 種屬 | 酸化心肌肌鈣蛋白抗體 |
巨噬細胞調(diào)控相關蛋白LRRFIP1抗體 | SW1990細胞,，人胰腺癌細胞 人胸膜瘤細胞,SMC-1細胞 雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7E7 |
酸化Bcl-10抗體 | 核小體結合蛋白1抗體 |
細胞周期蛋白依賴性激酶調(diào)節(jié)亞基2抗體 | DDR2 Others Human 人 DDR2 Kinase / CD167b 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
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