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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干采用沖洗骨髓,、消化骨內(nèi)膜、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干經(jīng)CD29、CD44免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干原代細(xì)胞 | 組織來源 | 股骨,、脛骨 |
英文名稱 | Mouse Endosteal Mesenchymal Stem Cells | 貨號 | YS-01X7522 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
小鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離自股骨、脛骨,；骨內(nèi)膜是一層致密結(jié)締組織膜,，覆蓋在骨的表面（關(guān)節(jié)面除外），新鮮骨內(nèi)膜呈粉紅色,，含有豐富的血管,、和成骨細(xì)胞。此外,，附著于骨的肌腱,、韌帶于附著部位都與骨內(nèi)膜編織在一起。因而骨內(nèi)膜與骨質(zhì)結(jié)合甚為牢固,。骨內(nèi)膜富含血管,、，通過骨質(zhì)的滋養(yǎng)孔分布于骨質(zhì)和骨髓,。骨內(nèi)膜分內(nèi),、外兩層，外層主要是粗大的膠原纖維束,，部分纖維穿入骨質(zhì),，使骨內(nèi)膜固定于骨面；內(nèi)層疏松,，含成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞（分別具有產(chǎn)生新骨質(zhì)和改建骨的功能）,。骨髓腔和骨松質(zhì)的網(wǎng)眼也襯著一層菲薄的結(jié)締組織膜，叫做骨膜,。骨內(nèi)膜的內(nèi)層和骨膜有分化成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的能力,，以形成新骨質(zhì)和破壞、改造已生成的骨質(zhì),，所以對骨的發(fā)生,、生長、修復(fù)等具有重要意義,。骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞,，可以向骨、軟骨,、肌組織,、皮膚、脂肪、等多種組織分化,，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞,。骨內(nèi)膜間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過程中,，受貼壁時間,、種植密度、血清含量,、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 豬胰島素單克隆抗體 |
胞粘蛋白1抗體抗體 | 細(xì)胞生長調(diào)控蛋白19/環(huán)指蛋白197抗體 |
鐵氧化還原蛋白還原酶抗體 | 髓0酯髓鞘蛋白1抗體 |
細(xì)胞表面蛋白F3 | 多能發(fā)育相關(guān)基因2抗體 |
1號染色體開放閱讀框167抗體 | I類組織相容性H-2抗原D-Dalpha鏈抗體 |
GPA33 Others Human 人 GPA33 / Glycoprotein-A33 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | CDH4 Others Human 人 R-Cadherin / CDH4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人扁桃體上皮細(xì)胞HTEpiC | HA Others H5N9 甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
hMNC-CB 人類臍帶血單核細(xì)胞團(tuán)塊單一捐獻(xiàn)者，超 > 1 mio.cells 人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHCMEC NA | BCCIP Others Human 人 BRCA2 / BCCIP 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HDLEC-c adult 人類皮膚淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(HDLEC)來自成年捐獻(xiàn)者 500,000cells 頜下腺上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | THPO Others Mouse 小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-M058小鼠膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠骨內(nèi)膜間充質(zhì)干原代細(xì)胞髓0酯髓鞘蛋白1抗體 |
Caov-3(人乳突狀卵巢腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0070CRFK(貓腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 615小鼠滑膜肉瘤瘤株;ZM755 | 人成骨細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
Saos-2,，人成骨肉瘤細(xì)胞 Human | WEHI-231小鼠B淋巴細(xì)胞 WEHI-231 B lymphocyte in mice DMEM+10% FBS+0.05mM β-Mercaptoethanol |
ATP1B1 Others Human 人 ATP1B1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 細(xì)胞死亡誘導(dǎo)蛋白抗體 |
LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
乳腺癌抑癌蛋白抗體 | 谷受體2B抗體 |
核苷酸結(jié)合蛋白1抗體 | GPA33 Others Human 人 GPA33 / Glycoprotein-A33 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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