詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療,!
細胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠鞏膜成纖維采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠鞏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠鞏膜成纖維原代細胞 | 組織來源 | 鞏膜組織 |
英文名稱 | Mouse Scleral Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7740 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
小鼠鞏膜成纖維細胞分離自鞏膜組織,鞏膜是眼球壁的主要組成之一,。是眼球纖維膜的后5/6部分,。前方聯(lián)接角膜,后方與視的鞘膜延續(xù),。鞏膜在視穿出部附近厚,,愈前愈薄,在肌腱附著處又復(fù)增厚,。其與角膜交界處,,外面有環(huán)形的角膜溝,深部有鞏膜靜脈竇,。小兒的鞏膜為淺藍色,,成年為白色,老年因脂肪沉著而帶黃色,。鞏膜結(jié)構(gòu)堅韌,,有支持和保護眼內(nèi)組織的作用。成纖維細胞是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,;成纖維細胞較大,,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,,細胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,在一定條件下,,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細胞基本貼壁,,伸展成梭形,胞核清晰,,分布較均勻,散在生長,,不聚集成團,;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),,細胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,平坦,、胞體較大,,細胞質(zhì)透明,細胞核較大,,呈橢圓形,,顏色淡。細胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳1-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時間1min左右,,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,,加1ml凍存液重懸細胞,;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,,將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,,每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,,每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,每次3min,。
7. 二抗孵育:選與一抗對應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,,PBS沖洗3次,每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍,。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),,以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品:
白鰱尾鰭細胞系;SCF 人成纖維細胞,,Hs 578T細胞 Acc-3(涎腺腺樣囊性癌細胞) | 果膠酶抑制蛋白18抗體 |
RNA結(jié)合蛋白20抗體 | 細胞核因子/k基因結(jié)合核因子抗體 |
0脂酰基醇蛋白聚糖-4抗體 | 蛋白激酶受體相關(guān)1β抗體 |
內(nèi)分泌肽QRFP抗體 | 破傷風(fēng)毒素輕鏈抗體 |
鋅指蛋白749抗體 | 基質(zhì)金屬蛋白酶20 |
人腎上腺皮質(zhì)癌細胞;SW-13 | L W-3A 小鼠皮下結(jié)締組織細胞 |
CM-H067人腎系膜細胞培養(yǎng)基100mL | B16-F10, 小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)移細胞 |
扁桃體上皮細胞培養(yǎng)基TEpiCM-prf | 豬腎細胞;PK(15) |
腎近曲管狀上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | IL36RN Protein Human 重組人 IL1F5 / IL36RN 蛋白 |
PC-12細胞,,大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤 人腎癌細胞,KC細胞 直腸癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)/1ml | 小鼠鞏膜成纖維原代細胞蛋白激酶受體相關(guān)1β抗體 |
大鼠腎系膜細胞;RMC | CSF1R Others Mouse 小鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細胞裂解液 (陽性對照) |
Y1細胞,,腎上腺皮質(zhì)細胞 人胰腺癌細胞,MIApaca-2細胞 CM-M008小鼠支氣管成纖維細胞培養(yǎng)基100mL | 成纖維細胞培養(yǎng)基FM-prf |
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-3A1 | 酸性核糖體0蛋白大亞基P0抗體 |
分選連接蛋白1抗體 | S-180(小鼠肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 |
抑制素βC抗體 | 半蛋白酶抑制劑樣蛋白1抗體 |
枯草溶菌素轉(zhuǎn)化酶1抑制劑抗體 | 人腎上腺皮質(zhì)癌細胞;SW-13 |