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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝枯否采用混合酶灌流消化,、低速離心、密度梯度離心,、差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝枯否經(jīng)CD68免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠肝枯否原代細(xì)胞 | 組織來源 | 肝臟組織 |
英文名稱 | Mouse Kupffer Cells | 貨號 | YS-01X7419 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
小鼠枯否細(xì)胞分離自肝臟組織,；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官,，位于機(jī)體中的腹部位置,，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺,，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹,，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,，僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接,。枯否氏細(xì)胞(Kupffer細(xì)胞)是肝臟的肝血竇內(nèi)一些固定于竇壁的巨噬細(xì)胞,，它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒,，并能吞噬和清除肝血竇中的細(xì)菌,、異物和衰老的紅細(xì)胞,，并把血紅蛋白分解成,。此外,，肝巨噬細(xì)胞也有處理抗原,，誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖，參與免疫調(diào)節(jié)的作用,。枯否氏細(xì)胞和一般巨噬細(xì)胞不同,，枯否氏細(xì)胞不具有增加抗原免疫原性的能力,，相反有消除或減弱抗原性的作用?？莘袷霞?xì)胞能吞噬來自血液循環(huán)的抗原抗體復(fù)合物和其他有害物質(zhì),，以消除這些物質(zhì)對機(jī)體的損害。枯否細(xì)胞功能障礙可導(dǎo)致腸源性內(nèi)毒素血癥,。電鏡下有很多皺褶和微絨毛,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、巨噬細(xì)胞
傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 （12mM）
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S2 | 整合素β3抗體 |
過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1β抗體 | 碳酸酶11抗體 |
纖連蛋白7抗體 | E3連接酶MMS21蛋白抗體 |
8號染色體開放閱讀框55抗體 | 抑癌基因抗體 |
1號染色體開放閱讀框177抗體 | 羥基酰谷甘肽水解酶樣蛋白抗體 |
TF Others Mouse 小鼠 ansferrin / CD176 / Seroansferrin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)株;293 001B 人腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人表皮黑色素細(xì)胞-深色素RNAHEM-d miRNA5 μg | 小鼠腦膜細(xì)胞(MMC)(5×105) |
PRSS8 Others Human 人 Prostasin / Prss8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | NBL1 Others Mouse 小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
SERPINA10 Others Mouse 小鼠 SERPINA10 / SerpinA10 / ZPI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HPF Pellet 人肺成纖維細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人海馬趾細(xì)胞裂解物HN-h L |
CM-M086小鼠真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠肝枯否原代細(xì)胞E3連接酶MMS21蛋白抗體 |
REG3D Others Mouse 小鼠 REG3D 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | MS751 人子宮頸表皮癌細(xì)胞 |
QBC-939, 人膽管癌細(xì)胞 Human | 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S1 卵巢癌細(xì)胞，H08910細(xì)胞 K-562(慢性髓原白血病細(xì)胞) |
人角膜上皮細(xì)胞 (HcorF)( 5×105 ) | 活化白細(xì)胞粘附分子抗體 |
低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1抗體 | 人細(xì)胞;Hela 人晶狀體上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
促凋亡Bik蛋白抗體 | 核小體組裝蛋白1抗體 |
細(xì)胞周期蛋白G相關(guān)激酶抗體 | TF Others Mouse 小鼠 ansferrin / CD176 / Seroansferrin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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