化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠鼻黏膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠鼻黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 小鼠鼻黏膜上皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 鼻黏膜 |
英文名稱(chēng) | Mouse Nasal Mucosal Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X8493 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠鼻黏膜上皮細(xì)胞分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在機(jī)體內(nèi)消化,、呼吸,、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu),，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成,。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜,、胃腸黏膜,、鼻腔黏膜、氣管黏膜,、陰道黏膜,、眼瞼黏膜等不同名稱(chēng)。它們的結(jié)構(gòu)也因功能,、部位不一而不盡相同,。鼻腔黏膜，簡(jiǎn)稱(chēng)鼻黏膜,，覆蓋于鼻腔表面,，黏膜下方為軟骨,、骨或骨骼肌。根據(jù)結(jié)構(gòu)與功能的不同,，鼻黏膜又分為前庭部,、呼吸部和嗅部三部分。前庭部是鄰近外鼻孔的部分,，有豐富的鼻毛可以阻擋空氣中較大的塵粒吸入,。呼吸部占鼻黏膜的大部，有發(fā)達(dá)的上皮纖毛,，它們可向咽部擺動(dòng),，黏著有塵粒、細(xì)菌的黏液排向咽部,，終將它們排出體外,。此外，此部分有豐富的血管與腺體,，對(duì)吸入的空氣有加溫和濕潤(rùn)作用,。嗅部黏膜范圍較小，主要位于鼻腔頂部,。它含有一種專(zhuān)司嗅覺(jué)的嗅細(xì)胞及嗅腺,，它們分泌能溶解到達(dá)嗅區(qū)的含氣味的微粒，刺激嗅細(xì)胞表面上的嗅毛產(chǎn)生嗅覺(jué),，而且還由于嗅細(xì)胞具有不同的受體,，可分別接受不同化學(xué)分子的刺激，因此可產(chǎn)生不同的嗅覺(jué),。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS,、EGF、Hydrocortisone,、腎上腺素,、甲狀腺素、Insulin,、Transferrin,、Selenium Solution、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
小鼠鼻黏膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
P3X63-Ag8.653細(xì)胞,，鼠骨髓瘤細(xì)胞 人Butt`s淋巴瘤細(xì)胞,NAMALWA細(xì)胞 小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤;M5076 | 骨硬化病相關(guān)跨膜蛋白1抗體 |
RFTN2蛋白抗體 | 細(xì)胞分裂周期蛋白8抗體 |
酸相互作用結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 | 蛋白激酶A調(diào)節(jié)亞基a1抗體 |
干細(xì)胞抑制相關(guān)蛋白TRIM32抗體 | 配對(duì)盒基因3抗體 |
鋅指蛋白393抗體 | 肌脂蛋白抗體 |
AsPC-1(人胰腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 小鼠正常肝細(xì)胞;NCTC 1469 [NCTC1469] |
MDA-MB-453細(xì)胞,，癌細(xì)胞 人食管鱗癌,KYSE 450細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414) | 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D2 |
小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IL17A Protein Human 重組人 IL17 / IL17A 蛋白 |
CL-0125J82(人膀胱癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | CL-0204Sf-21(昆蟲(chóng)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
THP1-Blue (穩(wěn)定株)人單核細(xì)胞 THP1-Blue (stable sain) in human monocytes 1640+10% FBS(熱滅活)+200ug/ml Zeocin+0.05mM β-ME | 小鼠鼻黏膜上皮原代細(xì)胞蛋白激酶A調(diào)節(jié)亞基a1抗體 |
肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105次方(1ml) | CL-0307SW1116(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
BSG Others Human 人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | Hela S3(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
小鼠卵巢上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | 四分子交聯(lián)體17抗體（四旋蛋白） |
肺α/β水解酶蛋白3抗體 | 人腎系膜細(xì)胞cDNAHRMC cDNA |
抑癌基因NDRG2抗體 | 白細(xì)胞介素4誘導(dǎo)蛋白1抗體 |
柯薩奇病毒蛋白受體B抗體 | AsPC-1(人胰腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀(guān)察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀(guān)察,。
化工儀器網(wǎng)