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詳細(xì)介紹
小鼠鼻黏膜成纖維原代細(xì)胞
小鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞分離自鼻黏膜組織,；黏膜是覆蓋在機(jī)體內(nèi)消化、呼吸,、泌尿,、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成,。根據(jù)部位不同,，有口腔黏膜、胃腸黏膜,、鼻腔黏膜,、氣管黏膜、陰道黏膜,、眼瞼黏膜等不同名稱,。它們的結(jié)構(gòu)也因功能、部位不一而不盡相同,。鼻腔黏膜,，簡稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面,，黏膜下方為軟骨,、骨或骨骼肌。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下,，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細(xì)胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
英文名稱 | Mouse Nasal Mucosal Fibroblast Cells | 組織來源 | 鼻黏膜 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8492 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：小鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞
組織來源：鼻黏膜
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
小鼠鼻黏膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠鼻黏膜成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠鼻黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
兔主動脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1 | γ干擾素誘導(dǎo)蛋白202抗體 |
前列腺素F2a受體抗體PGF2αR | Centaurin α1抗體 |
FKBP135蛋白抗體 | 雙微體2癌基因抗體 |
畸胎瘤衍化生長因子抗體(C端) | 特異性DMRT3蛋白抗體 |
1號染色體開放閱讀框65抗體 | β氨基己糖苷酶A抗體 |
CHL1 Others Mouse 小鼠 CHL-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | Cellgro 25-072-CI Lymphocyte Separation Medium( 100ml |
人成纖維細(xì)胞裂解物HMFL | AGO3 Others Human 人 AGO3 / Argonaute 3 / EIF2C3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
METAP1 Others Human 人 METAP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | BCAM Others Human 人 BCAM 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
LS-174T(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 PRNP / Prion 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | BGN Others Mouse 小鼠 Biglycan / PG-S1 / BGN 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R020大鼠上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠鼻黏膜成纖維原代細(xì)胞雙微體2癌基因抗體 |
PRKD2 Others Human 人 PRKD2 / PKD2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞 |
人癌細(xì)胞;MDA-MB-231 | hMNC-PB single donor Pellet 人類外周血單核細(xì)胞團(tuán)塊單一捐獻(xiàn)者,，超 > 1 mio.cells 人羊膜上皮細(xì)胞總RNAHAmEpiC NA |
F98大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 F98 rat glioma cells DMEM+10%FBS | 6號染色體開放閱讀框223抗體 |
Rho的核苷酸交換因子12抗體 | CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
乳腺癌相關(guān)蛋白2抗體 | 高分子量絲蛋白抗體 |
糖基轉(zhuǎn)移酶8結(jié)構(gòu)域1抗體 | CHL1 Others Mouse 小鼠 CHL-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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