兔棕色脂肪原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：人原代皮層元細(xì)胞 NRK-52E(大鼠小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞) HPAEC 人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì) 1ml/T75 肝癌細(xì)胞HBV病毒株 MCF-7 人癌細(xì)胞 兔原代外周血單個(gè)核細(xì)胞

兔棕色脂肪原代細(xì)胞

兔棕色脂肪細(xì)胞分離自棕色脂肪組織,；動(dòng)物體內(nèi)存在棕色和白色兩種脂肪,，白色脂肪堆積在皮下,，負(fù)責(zé)儲(chǔ)存多余熱量；棕色脂肪負(fù)責(zé)分解引發(fā)肥胖的白色脂肪,，將后者轉(zhuǎn)化成二氧化碳,、水和熱量，本身不儲(chǔ)存熱量,。棕色脂肪組織呈棕色,，其特點(diǎn)是組織中有豐富的毛細(xì)血管，脂肪細(xì)胞內(nèi)散著許多小脂滴,，線粒體大而豐富,，核圓形，位于細(xì)胞中央,，這種脂肪細(xì)胞也稱為多泡脂肪細(xì)胞,。棕色脂肪組織在成年動(dòng)物極少，新生兒及冬眠動(dòng)物較多,，在新生兒主要分布在肩胛間區(qū),、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時(shí)期發(fā)揮作用,，它們堆積在新生兒肩胛處,，幫助維持體溫。隨著年齡增長(zhǎng),，棕色脂肪會(huì)逐漸消失,。終,，動(dòng)物體內(nèi)只殘存少量棕色脂肪細(xì)胞，分布于頸部和鎖骨,。脂肪細(xì)胞分為白色脂肪細(xì)胞和褐色（棕色）脂肪細(xì)胞,，常呈白色，在嬰幼兒期大量增殖,，到青春期數(shù)量達(dá)到巔,，此后數(shù)量一般不再增加。細(xì)胞內(nèi)含有大量富含脂肪的小泡,，稱為脂質(zhì)泡,，富含光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。此外,，還有一種褐色脂肪細(xì)胞,，在動(dòng)物體內(nèi)主要存在于肩胛骨間、頸背部,、腋窩,、縱隔及腎臟周圍，含有高度團(tuán)縮的褐色脂肪,，作用是將脂質(zhì)分解產(chǎn)熱,，調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)比例。

產(chǎn)品名稱：兔棕色脂肪細(xì)胞

組織來源：脂肪

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL(0.1mg/ml)

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS、EGF,、Insulin,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形,、多角形

傳代特性：屬于終末分化細(xì)胞,；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔棕色脂肪細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

方法簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)室分離的兔棕色脂肪采用膠原酶-酶聯(lián)合消化法獲得前脂肪細(xì)胞，經(jīng)成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔棕色脂肪經(jīng)油紅O染色檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2,、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。