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詳細(xì)介紹
兔椎間盤纖維環(huán)原代細(xì)胞
兔椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間,，由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個(gè)密封體,。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上,，下面骺環(huán)中間的骨面,。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,，位于髓核的四周,。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,，使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷,。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚,，而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強(qiáng)大的前縱韌帶,，后側(cè)的后縱韌帶較窄,、較薄。纖維環(huán)細(xì)胞密度為9000個(gè)細(xì)胞/mm3,，其外層的細(xì)胞呈梭型,，主要屬于纖維細(xì)胞，內(nèi)層細(xì)胞呈圓形,，主要屬于軟骨細(xì)胞,。在培養(yǎng)的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn),，它們的核較圓,，核仁較明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體多,，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜,，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體,。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒，纖維環(huán)細(xì)胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛,，保證纖維環(huán)生理代謝活動(dòng)所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給,。一但這種供給減少，纖維環(huán)的生物性能就會(huì)減弱,，椎間盤開始退變,。
英文名稱 | Rabbit Intervertebral Disc Fibroblast Cells | 組織來源 | 椎間盤組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7132 |
細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞
組織來源：椎間盤組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形,、多角形
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔椎間盤纖維環(huán)采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔椎間盤纖維環(huán)經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
DU 145人前列腺癌細(xì)胞 DU 145 human prostate cancer cell F-12+10%FBS | 骨形態(tài)發(fā)生蛋白4抗體 |
Ras樣蛋白A+B抗體 | 細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體 |
酸激酶α1抗體 | 蛋白激酶A2抗體 |
叢蛋白A3抗體 | 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體 |
鋅指蛋白297B抗體 | 肌相關(guān)蛋白DAG1抗體 |
CTF1 Protein Human 重組人 Cardioophin-1 / CTF1 蛋白 | Wistar大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 Wistar rat bone marrow mesenchymal stem cells |
SH-SY5Y細(xì)胞，人上皮瘤細(xì)胞 雷氏菌 人肝細(xì)胞RNAHH miRNA5 μg | SK-CO-1(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞HMSC-ad | 水貂肺上皮細(xì)胞;Mv.1.Lu(NBL-7) |
JF305 胰腺癌 | CL-0199RSC96(大鼠雪旺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
SK-MES-1細(xì)胞,，人肺癌細(xì)胞 人膀胱鱗癌細(xì)胞,ScaBER細(xì)胞 人前脂肪細(xì)胞-皮下HPA-s | 兔椎間盤纖維環(huán)原代細(xì)胞蛋白激酶A2抗體 |
肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | MC細(xì)胞,，大鼠巨噬細(xì)胞 THP-1(人單核細(xì)胞) 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4A |
EFNA1 Others Human 人 EFNA1 / Ephrin-A1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
成纖維細(xì)胞生長添加物FGS | 死亡相關(guān)蛋白6/Fas死亡區(qū)相關(guān)蛋白抗體 |
非受體型酪蛋白激酶Tnk1抗體 | 人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R |
異質(zhì)性核糖核蛋白M抗體 | 白細(xì)胞介素-20抗體 |
抗利尿激素1A抗體 | CTF1 Protein Human 重組人 Cardioophin-1 / CTF1 蛋白 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
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