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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,，不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的兔主動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的兔主動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔主動脈平滑肌原代細胞 | 組織來源 | 主動脈組織 |
英文名稱 | Rabbit Aortic Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X7124 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔主動脈平滑肌細胞分離自主動脈組織,；主動脈是體循環(huán)的動脈主干,。其運行路徑為：升主動脈起于左心室，至右側(cè)第2胸肋關節(jié)高度移行為主動脈弓,，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈,；在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈，以上為胸主動脈,，至第4腰椎體下緣分為左,、右髂總動脈；髂總動脈在骶髂關節(jié)高度分為髂內(nèi),、外動脈,。主動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。主動脈平滑肌細胞在心血管疾病發(fā)生,、發(fā)展中具有重要作用，以主動脈平滑肌細胞為實驗研究對象,，探討心血管疾病相關發(fā)病機制是目前研究的熱點,；體外培養(yǎng)的主動脈平滑肌細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基,。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
豚鼠皮膚細胞;GP-S1 | 非洲爪蟾IGC抗體 |
酸化蛋白激酶C/p-PKC ε抗體 | 細胞因子受體樣因子1抗體 |
二單加氧酶3抗體 | 基質(zhì)金屬蛋白酶-14抗體 |
酸化細胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體 | 胞漿動力蛋白中間鏈1抗體 |
20號染色體開放閱讀框107抗體 | HDHD2B蛋白抗體 |
IGFBP7 Others Human 人 IGFBP7 / IBP-7 人細胞裂解液 (陽性對照) | PLA2G1B Others Mouse 小鼠 Phospholipase-A2 / PLA2G1B 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人導管瘤細胞;UACC812 | CD93 Others Human 人 CD93 / C1QR1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
95-D(人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H099人真皮淋巴上皮細胞培養(yǎng)基100mL 人胚肺成纖維細胞;CCC-HPF-1 | HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
CTSD Others Mouse 小鼠 Cathepsin D / CTSD 人細胞裂解液 (陽性對照) | MDCK[NBL-2]狗腎上皮細胞 MDCK[NBL-2] canine kidney epithelial cells MEM+10% FBS |
CM-R039大鼠胃粘膜上皮細胞培養(yǎng)基100mL | 兔主動脈平滑肌原代細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-14抗體 |
大鼠肺細胞;WL1 | 人卵巢腺癌細胞;SK-OV-3 |
DU 145 人前列腺癌細胞 | SELE Others Mouse 小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細胞裂解液 (陽性對照) |
S100A2 Others Human 人 S100A2 人細胞裂解液 (陽性對照) | 3號染色體開放閱讀框67抗體 |
瘦素抗體 | L1210細胞，小鼠白血病細胞 多形擬桿菌 大額牛腎細胞;BFR-K1 |
Bcl2相互作用蛋白2抗體 | 絲/蘇蛋白激酶NEK9抗體 |
生長分化因子8/肌肉抑制素抗體 | IGFBP7 Others Human 人 IGFBP7 / IBP-7 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中,，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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