化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔直腸黏膜上皮采用先機(jī)械分離法,、后膠原酶消化法并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔直腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔直腸黏膜上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 直腸 |
英文名稱 | Rabbit Rectal Mucosal Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8481 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔直腸黏膜上皮細(xì)胞分離自直腸組織；直腸為大腸的未段,，位于小骨盆內(nèi),。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結(jié)腸，沿骶骨和尾骨的前面下行,，穿過盆膈,，下端以門而終。直腸上端的大小似結(jié)腸,，其下端擴(kuò)大成直腸壺腹,，是糞便排出前的暫存部位，下端變細(xì)接管,。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關(guān)系密切,，與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪,、無縱帶,，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈,，來自髂內(nèi)動脈的直腸中動脈和來自髂內(nèi)動脈的直腸下動脈,。腸黏膜上皮細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中,，也是機(jī)體面對病原微生物的第一道防線,。因此，腸黏膜上皮細(xì)胞除有吸收,、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外,，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機(jī)制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細(xì)胞作為首先接觸抗原的細(xì)胞,，在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用,，它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強(qiáng)度,。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔直腸黏膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
豚鼠皮膚細(xì)胞;GP-S2 | 干擾素-γ/IFN-γ抗體 |
浦肯野細(xì)胞相關(guān)蛋白1抗體 | 網(wǎng)蛋白CopineVI抗體 |
酸化脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF1抗體 | 基質(zhì)金屬蛋白酶-7抗體 |
免疫球蛋白G Fc段受體I | 鋅指蛋白DZIP1抗體 |
20號染色體開放閱讀框118抗體 | HEATR3蛋白抗體 |
NRP1 Others Cynomolgus 食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 人角膜成纖維細(xì)胞 (HcorF)( 5×105 ) EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細(xì)胞 Rattus |
人低分化肺腺癌細(xì)胞;SK-LU-1 | CANX Others Human 人 CANX / Calnexin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
MMP1 Others Human 人 MMP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | SELP Others Human 人 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
DLL1 Others Human 人 DLL1 / Delta-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TMEM25 Others Human 人 TMEM25 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R044大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔直腸黏膜上皮原代細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-7抗體 |
CN5 Others Mouse 小鼠 Coactin 5 / CN5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | GRN Protein Mouse 重組小鼠 Granulin / GRN / Progranulin 蛋白 (His 標(biāo)簽) |
人癌細(xì)胞;MCF7 | hMNC-PB pooled Pellet 人類外周血單核細(xì)胞團(tuán)塊混合來源,，超 > 1 mio.cells 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞總RNAHUMSC NA |
F9小鼠畸胎瘤細(xì)胞 F9 mouse teratoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素7抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體69B | ADAM8 Others Cynomolgus 食蟹猴 ADAM8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
B淋巴細(xì)胞酪激酶抗體 | 多胺調(diào)控因子1抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體70抗體 | NRP1 Others Cynomolgus 食蟹猴 Neuropilin-1 / NRP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
化工儀器網(wǎng)