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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔支氣管上皮采用蛋白酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合機械刮刷并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔支氣管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔支氣管上皮原代細胞 | 組織來源 | 支氣管 |
英文名稱 | Rabbit Bronchial Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7991 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔支氣管上皮細胞分離自支氣管組織,；支氣管（Bronchi），是指由氣管分出的各級分枝,，由氣管分出的一級支氣管,，即左、右主支氣管,。左主支氣管與右主支氣管相比較,，前者較細長，走向傾斜,；后者較粗短,，走向較前者略直，所以經(jīng)氣管墮入的異物多進入右主支氣管,。支氣管和氣管還有以區(qū)別就是,，氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架，而支氣管不是,。支氣管上皮是氣道與外界環(huán)境接觸的第一道防線,，不僅是各種病原體、炎癥介質(zhì)作用的靶細胞，還作為效應(yīng)細胞合成,、釋放多種炎性介質(zhì)和細胞因子,，從而參與氣道炎癥及免疫反應(yīng)。支氣管上皮細胞在哮喘,、慢性阻塞性肺疾病,、肺癌、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發(fā)病機制中均起著重要的作用,。體外培養(yǎng)的原代支氣管上皮細胞因與體內(nèi)組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上存在很大的相似性,，因此，在基礎(chǔ)及臨床研究中極為重要,。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔支氣管上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞培養(yǎng)方法：
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。
3,、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
豚鼠皮膚細胞;GP-S3 | 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2抗體 |
蛋白質(zhì)酸酶2A-B55抗體 | 鈣依賴分泌激活蛋白1抗體 |
甲精結(jié)合蛋白3抗體 | 髓鞘少樹突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體 |
衰變加速因子CD55抗體 | 多能發(fā)育相關(guān)基因4抗體 |
20號染色體開放閱讀框151抗體 | 單甲基組蛋白H3K9抗體 |
EPD1 Others Mouse 小鼠 CD39 / EPD1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | F3 Others Mouse 小鼠 F3 / Tissue factor / CD142 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細胞;OCM-1A | ERBB2 Others Human 人 HER2 / ErbB2 / CD340 (676-1255) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
786-O(人腎透明細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H091人大隱靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基100mL 人臍動脈內(nèi)皮細胞RNAHUAEC miRNA5 μg | ESM1 Others Human 人 ESM1 / Endocan 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
HDLEC-c 人類皮膚淋巴管內(nèi)皮細胞(HDLEC)來自少年者 500,000cells 骨細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | HUF Pellet 人子宮成纖維細胞團塊 > 1 mio.cells 人淋巴內(nèi)皮細胞裂解物HLECL |
CM-R047大鼠腸微血管細胞培養(yǎng)基100mL | 兔支氣管上皮原代細胞髓鞘少樹突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體 |
HCASMC-c 人冠狀動脈平滑肌細胞(HCASMC) 500,000cells 小腸隱窩上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 兔脂肪間質(zhì)干細胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells |
RN-s, 大鼠紋狀體元 Rattus | 水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S4 胃腺癌細胞,，SGC7901細胞 CW-2(結(jié)腸腺癌細胞) |
IFNGR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNGR / IFNGR1 人細胞裂解液 (陽性對照) | P450 19抗體 |
上游結(jié)合蛋白1抗體 | ECE2 Others Human 人 ECE-2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
腦特異性血管生成抑制蛋白2抗體 | 肌痙攣性癲癇病相關(guān)EPM2蛋白抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體激酶6抗體 | EPD1 Others Mouse 小鼠 CD39 / EPD1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片,，待細胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍,。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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