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詳細(xì)介紹
兔支氣管平滑肌原代細(xì)胞
兔支氣管平滑肌細(xì)胞分離自支氣管組織,；支氣管（Bronchi）,，是指由支氣管分出的各級(jí)分枝,，由支氣管分出的一級(jí)支氣管，即左,、右主支氣管,。左主支氣管與右主支氣管相比較，前者較細(xì)長(zhǎng),，走向傾斜,；后者較粗短，走向較前者略直,，所以經(jīng)支氣管墮入的異物多進(jìn)入右主支氣管,。支氣管和支氣管還有以區(qū)別就是，支氣管是以“C"型的支氣管軟骨為支架,，而支氣管不是,。支氣管平滑肌細(xì)胞主要功能：①支氣管平滑肌細(xì)胞能維持支氣管張力，保持支氣管形態(tài),；②支氣管平滑肌特異的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和調(diào)節(jié)機(jī)制是支氣管正常生理功能的基礎(chǔ),；③支氣管平滑肌通過(guò)分泌細(xì)胞因子和趨化因子等促炎介質(zhì)，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能,。支氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。
英文名稱(chēng) | Rabbit Bronchial Smooth Muscle Cells | 組織來(lái)源 | 支氣管 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X7769 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱(chēng)：兔支氣管平滑肌細(xì)胞
組織來(lái)源：支氣管
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳5代左右,；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
兔支氣管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔支氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔支氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
PG-BE1細(xì)胞，人肺巨細(xì)胞癌(PG)的高轉(zhuǎn)移亞系 敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞,BHK-21細(xì)胞 CL-0034BHK-21(倉(cāng)鼠腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切酶抗體 |
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酸化組蛋白去乙酰化酶8抗體 | 蛋白C抑制因子抗體 |
酸鹽耐藥蛋白ARS2抗體 | 膀癌缺失基因1 |
鋅指蛋白239抗體 | 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白3抗體 |
STO(小鼠胚成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 |
MN-s, 小鼠紋狀體元 MSU-1細(xì)胞 Ha Fe(羊膜細(xì)胞) | 急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;TALL-104 |
大鼠垂體細(xì)胞RPC | IAR20(大鼠肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
Walker氏癌肉瘤256瘤株;W256 | CL-0194RF/6A(猴視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
BeWo細(xì)胞，人胎盤(pán)絨膜癌細(xì)胞 新生牛眼晶體上皮細(xì)胞,NBLE細(xì)胞 人無(wú)色素睫狀上皮細(xì)胞HNPCEpiC | 兔支氣管平滑肌原代細(xì)胞蛋白C抑制因子抗體 |
肝竇內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | BE(2)-M17細(xì)胞,，人母細(xì)胞瘤細(xì)胞 寄生曲霉 293來(lái)源病毒包裝細(xì)胞;ΦA |
EPHB4 Others Mouse 小鼠 EPHB4 / HTK 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0911 |
角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)添加物(不含BPE)KGS-2 | 死亡結(jié)構(gòu)域蛋白NRH2抗體 |
非霍奇金淋巴瘤重復(fù)蛋白2抗體 | 人腎上皮細(xì)胞總RNAHREpiC NA |
異質(zhì)核糖核蛋白hnRNPA2抗體 | 白細(xì)胞介素-18受體α鏈抗體 |
抗表皮生長(zhǎng)因子抗體 | STO(小鼠胚成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi),；
1. 細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
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