詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療,!
細(xì)胞屬性:
方法簡(jiǎn)介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔羊膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔羊膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔羊膜上皮原代細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 胎盤組織 |
英文名稱 | Rabbit Amniotic Epithelial Cells | 貨號(hào) | YS-01X7171 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔羊膜上皮細(xì)胞分離自胎盤組織,;胎盤(placenta)是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官,由羊膜,、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成,。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營(yíng)養(yǎng),,而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性,。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官,。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,,胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,,以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換,,這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤,。羊膜是胎盤的內(nèi)層,與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,,含有眼表上皮細(xì)胞,包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì),,其光滑,,無(wú)血管、及淋巴,,具有一定的彈性,;在電鏡下,其分為五層:上皮層,、基底膜,、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層,,羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,,主要為Ⅰ、Ⅲ,、Ⅳ,、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白,、層粘連蛋白等成份,。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成,均具有多分化潛能,,可轉(zhuǎn)化為元,,且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)因子的功能,。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1,、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,;
②加入2ml0.25%(T25瓶),,使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化,;
③1-2min后,,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,;若細(xì)胞還是貼壁,,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,,棄上清,,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,,放入-80℃冰箱,,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
操作步驟:
1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,,4%的多聚甲醛固定爬片15min,,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,,使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),,PBS沖洗3次,,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,,PBS沖洗3次,,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗,,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,,PBS沖洗3次,,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,,按比例稀釋后滴加在爬片上,,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,,每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,,顯微鏡下觀察,,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),,再用蓋玻片蓋上,,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品:
恒河猴肺細(xì)胞;RM-L1 人子細(xì)胞,,HT-3細(xì)胞 SK-BR-3(腺癌細(xì)胞) | 骨骼肌細(xì)胞粒體膜蛋白PARL抗體 |
Ras特異性核苷酸釋放因子1 | 細(xì)胞分化促進(jìn)因子77抗體 |
酸化組蛋白去乙?;?span>3抗體 | 膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體 |
少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子3抗體 | 扭轉(zhuǎn)蛋白B抗體 |
鋅指蛋白146抗體 | 肌肽二肽酶1抗體 |
人骨肉瘤細(xì)胞;HOS | CM-H015人支氣管成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
615小鼠T細(xì)胞性白血病瘤株;L7712 小鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 Mouse |
大鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞RA-c | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;HH-01 |
原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100 | 小鼠腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
非洲綠猴腎細(xì)胞;GL-37 鼻咽癌細(xì)胞,CNE細(xì)胞 AsPC-1(轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞) | 兔羊膜上皮原代細(xì)胞膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體 |
人Burkkit淋巴瘤細(xì)胞;Daudi | Y3-Ag 1.2.3(大鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100ml |
NOTCH1 Others Mouse 小鼠 Notch-1 / NOTCH1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) | CM-M028小鼠食管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
盤羊皮膚細(xì)胞;ASHS3 | 原活化蛋白激酶酸酶p38γ抗體 |
防御素β1/Defensin β1抗體 | BHK-21 [C-13] 倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞 |
異染色質(zhì)蛋白1-α(HP1α)抗體 | 白細(xì)胞介素-10受體β抗體 |
卷曲螺旋域蛋白質(zhì)85C抗體 | 人骨肉瘤細(xì)胞;HOS |