兔羊膜胚胎原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：豚鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human surface membrane immunoglobulin (SmIg) ELISA Kit 人細(xì)胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)試劑盒
HumanhistoneH2A-H2B-DNAaoaibodyELISAKit 人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體

本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的兔羊膜胚胎采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的兔羊膜胚胎經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

 

細(xì)胞簡介：

兔胚胎羊膜細(xì)胞分離自羊膜組織,；羊膜為單層上皮細(xì)胞互相連接構(gòu)成的薄膜,。單層上皮細(xì)胞具有分泌羊水的作用,。隨著胚胎的生長發(fā)育，羊膜與絨毛密切緊貼,，形成胎膜,。胎膜隨著羊膜腔逐漸擴(kuò)大而呈半透明的薄膜，無血管,，富有韌性（胎膜也就是羊膜腔的囊壁）,。羊膜腔內(nèi)充滿的液體為羊水。羊膜僅覆蓋在胎盤的兒體面,，并不深入胎盤組織中,，隨著妊娠的進(jìn)展羊膜腔逐漸擴(kuò)大，占據(jù)整個子宮腔,，羊膜是胎膜內(nèi)一層,，是一層半透明的薄膜，與覆蓋在胎盤,、臍帶的羊膜層相連接,。羊膜是胎盤的內(nèi)層，與人眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,，含有眼表上皮細(xì)胞,，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長所需要的物質(zhì)，其光滑,，無血管,、及淋巴，具有一定的彈性,，厚0.02~0.5mm,，在電鏡下，其分為五層：上皮層,、基底膜,、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層,，羊膜基底膜和羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,，主要為i、iii,、iv,、v、vii型膠原和纖維粘連蛋白,、層粘連蛋白等成份,，正是這些成份使羊膜可以充當(dāng)“移植的基底膜"而發(fā)揮一種新的健康合適的基質(zhì)。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成,，均具有多分化潛能,，可轉(zhuǎn)化為元，且還有合成,、釋放生物活性物質(zhì)和營養(yǎng)因子的功能,。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。

公司產(chǎn)品：

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。

6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。

8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。

9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。

11. 鏡檢觀察,。