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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔嗅鞘采用-膠原酶聯(lián)合消化法、結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔嗅鞘經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔嗅鞘原代細(xì)胞 | 組織來源 | 嗅球 |
英文名稱 | Rabbit Olfactory Ensheathing Cells | 貨號 | YS-01X8459 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
兔嗅鞘細(xì)胞分離自嗅球組織；嗅鞘細(xì)胞（OECs）是在功能上介于施旺細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細(xì)胞,，具有營養(yǎng),、抑制膠質(zhì)增生,、瘢痕形成、成鞘作用等,；為軸突生長提供了適宜的微環(huán)境及較強(qiáng)的遷移的特性,，使其成為促進(jìn)中樞再生的理想候選細(xì)胞之一。嗅鞘細(xì)胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞系統(tǒng)可以再生細(xì)胞之一,，其特點(diǎn)為終身具有再生功能,，還能夠釋放多種營養(yǎng)因子、粘附分子,。被認(rèn)為是髓鞘化能力強(qiáng)的膠質(zhì)細(xì)胞,，逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細(xì)胞與膠質(zhì)細(xì)胞,、雪旺細(xì)胞在表現(xiàn)型上有共同點(diǎn),，它們都能促進(jìn)軸突的再生，主要區(qū)別在于嗅鞘細(xì)胞不但存在于中樞系統(tǒng),，也存在于外周中,。嗅鞘細(xì)胞被認(rèn)為是一種可塑性很高的細(xì)胞，它可表現(xiàn)出多種細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)志,，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中,，嗅鞘細(xì)胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR,、GFAP,、和O4可標(biāo)記大部分在體嗅鞘細(xì)胞，然而在嗅球外層O4陽性嗅鞘細(xì)胞仍然可以在P75NTR陽性細(xì)胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽性的細(xì)胞層,，還有一定比率的嗅鞘細(xì)胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性,。嗅黏膜中的元是生后才生長并在成年時繼續(xù)分化的元，壽命為4-12周,，隨著新細(xì)胞的生長,，又建立了新的支配關(guān)系。嗅鞘細(xì)胞存在于嗅及嗅球的層上,，沿嗅的全長,，從周圍系統(tǒng)到中樞分布。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：元,、上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1代,，不建議傳代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%
兔嗅鞘細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
細(xì)胞衰老檢測試劑盒CSA | 整合素β7抗體 |
酸化過氧化酶活化增生受體γ抗體 PPARγ | 細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白1/微管蛋白折疊輔助因子B抗體 |
酸化叉頭蛋白4抗體 | 膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體 |
CD329抗體 | 染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1抗體 |
22號染色體開放閱讀框13抗體 | 絲蛋白酶抑制劑13抗體 |
ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | B16-F1(小鼠黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人星形膠質(zhì)細(xì)胞HA |
人肺成纖維細(xì)胞cDNAHPF cDNA | PTPN2 Others Mouse 小鼠 PTPN2 / TC-PTP (aa 2-314) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H059人子宮頸上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞RNAHIBEpiC miRNA5 μg | HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
IL1RAPL1 Others Human 人 IL1R8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TNK2 Others Human 人 ACK1 / TNK2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R079大鼠冠狀動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔嗅鞘原代細(xì)胞膜相關(guān)環(huán)指蛋白2抗體 |
GPX7 Others Human 人 GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HBL-100(人整合SV40基因的上皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;CGM1 | PDGFRA Others Human 人 PDGFRa / CD140a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-2 7721肝癌細(xì)胞,，7721細(xì)胞 HuT78(T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) | 細(xì)胞角蛋白4抗體 |
富含亮重復(fù)跨膜元蛋白3抗體 | PLK1 Others Mouse 小鼠 PLK1 / PLK-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白19抗體 | 谷受體3A+3B抗體 |
胃泌素/蛙皮素抗體 | ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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