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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔心臟微血管內(nèi)皮采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔心臟微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔心臟微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 心臟 |
英文名稱 | Rabbit Cardiac Microvascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X8142 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自心臟組織,；心臟是脊椎動物身體中重要的一個器官，主要功能是為血液流動提供壓力,，把血液運行至身體各個部分,。心臟由心肌構(gòu)成，左心房,、左心室,、右心房、右心室四個腔組成,。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開,，故互不相通，心房與心室之間有瓣膜（房室瓣）,，這些瓣膜使血液只能由心房流入心室,，而不能倒流。心臟的作用是推動血液流動,，向器官,、組織提供充足的血流量，以氧和各種營養(yǎng)物質(zhì),，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳,、無機鹽、尿素和尿酸等）,，使細(xì)胞維持正常的代謝和功能,。心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞是組成心臟微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力,、調(diào)節(jié)血壓,、抗血栓形成等有重要作用，在心臟血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學(xué)意義,。近年來大量研究表明，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能和病理改變直接影響心肌細(xì)胞功能,，也是諸多毒素,、炎癥因子及病毒等重要靶位，其作為體外研究的細(xì)胞模型在心肌缺血-再灌注發(fā)病機制和細(xì)胞間旁分泌細(xì)胞生長因子研究中起著重要作用,。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、EGF,、bFGF,、IGF、VEGF、Heparin,、Hydrocortisone,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
公司產(chǎn)品：
小腸隱窩上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 胰島素受體底物-3抗體 |
蛋白酪酸酶受體PCPTP1抗體 | cereblon蛋白抗體 |
FOXRED2蛋白抗體 | 髓過氧化物酶抗體 |
嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白14抗體 | 轉(zhuǎn)錄因子ETV6抗體 |
補體C2b鏈多肽抗體 | 熱休克蛋白β7抗體 |
ERP27 Others Human 人 ERP27 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 人胚腎細(xì)胞;293 Cells, low passage 人心室肌細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
人肺成纖維細(xì)胞RNAHPF miRNA5 μg | IGSF8 Others Human 人 PGRL / IGSF8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
NRP1 Others Human 人 NRP1 / Neuropilin-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TYRP1 Others Human 人 P1 / TYRP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
VNN2 Others Human 人 VNN2 / Vanin-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | TNFRSF4 Others Human 人 TNFRSF4 / CD134 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R084大鼠骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔心臟微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞髓過氧化物酶抗體 |
IM-9(人外周血B淋巴細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 遲緩真桿菌/遲緩埃格特菌 | 山羊皮膚成纖維樣細(xì)胞;DG-S1 |
LGALS1 Protein Human 重組人 Galectin-1 / LGALS1 蛋白 | 97H人肝癌細(xì)胞 97H human hepatocarcinoma cells DMEM+10%FBS |
人食道上皮細(xì)胞(HEEC)(5×105 ) | 5號染色體開放閱讀框34抗體 |
淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎蛋白抗體 | VCAM1 Others Mouse 小鼠 VCAM1 / CD106 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
BOLA1蛋白抗體 | 硝基酪抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體49抗體 | ERP27 Others Human 人 ERP27 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
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