化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小氣道上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小氣道上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔小氣道上皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 小氣道 |
英文名稱 | Rabbit Small Airway Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X8456 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
兔小氣道上皮細(xì)胞分離自小氣道,；臨床上通常將內(nèi)徑小于2mm的小細(xì)支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小,，但易阻塞的特點(diǎn),。在平靜吸氣時(shí)，空氣進(jìn)入狹窄的鼻咽部,，產(chǎn)生渦流,。由于小氣道已無軟骨支持，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后,，管腔通暢性不象軟骨性氣道,，易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細(xì)胞形成連續(xù)呼吸道內(nèi)層,，作為隔絕外界有害物質(zhì)的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用,。小氣道位于肺泡和氣管的交界處，這些細(xì)胞在功能上能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),、產(chǎn)生化學(xué)因子進(jìn)行宿主防御,、表達(dá)粘附分子，并可能通過HLA-DR表達(dá)呈遞抗原,；它們還能產(chǎn)生液體有助于肺液的平衡,。許多呼吸道疾病，如哮喘,、支氣管炎,、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化，都涉及呼吸道表面上皮細(xì)胞的破壞,；小氣道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴(kuò)增疾病和重塑提供新的治療選擇,。小氣道的生理功能特點(diǎn)：①小氣道阻力小,；②氣流速度慢,；③可調(diào)節(jié)控制通氣與血流比例,。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔小氣道上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品：
散鱗鏡鯉尾鰭細(xì)胞;YZ21 人成纖維細(xì)胞，Hs 578Bst細(xì)胞 HO-8910PM(高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞) | 谷甘肽硫轉(zhuǎn)移酶ω1抗體 |
RAS癌基因相關(guān)蛋白RAB7抗體 | 細(xì)胞凋亡敏感性基因抗體 |
酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體 | 調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體 |
上皮細(xì)胞有絲分裂蛋白抗體 | 12重鏈抗體 |
心臟鉀離子通道蛋白亞基2抗體 | 肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體 |
人結(jié)直腸癌細(xì)胞;T84 | 豬小腸上皮細(xì)胞;ZYM-DIEC02 |
黑化大家鼠肺成纖維細(xì)胞;NRm 管癌細(xì)胞,，BT549細(xì)胞 MA-782細(xì)胞,，鼠癌細(xì)胞系 | GH3, 大鼠垂體生長激素腺瘤 Rattus |
小鼠海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞MA-h | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0928 |
腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 小鼠腸粘膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
猴腎細(xì)胞;Vero IgCD4 人巨核細(xì)胞白血病，CHRF細(xì)胞 SK-N-MC(上皮瘤細(xì)胞) | 兔小氣道上皮原代細(xì)胞調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1抗體 |
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B | EFNA4 Others Mouse 小鼠 EFNA4 / Ephrin-A4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
人上皮細(xì)胞(HMEpiC) (5×105) | CM-M020小鼠上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
DH82 狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞 | 原活化蛋白激酶MKK6抗體 |
芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體 | CM-H013人小氣道平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL |
乙型肝炎X蛋白HBX抗體 | 白介素6抗體(N端) |
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白89抗體 | 人結(jié)直腸癌細(xì)胞;T84 |
化工儀器網(wǎng)