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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小氣道平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小氣道平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
產(chǎn)品名稱 | 兔小氣道平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來源 | 小氣道 |
英文名稱 | Rabbit Small Airway Smooth Muscle Cells | 貨號(hào) | YS-01X8455 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔小氣道平滑肌細(xì)胞分離自小氣道組織；臨床上通常將內(nèi)徑小于2mm的小細(xì)支氣管稱為小氣道,。小氣道具有氣流阻力小,，但易阻塞的特點(diǎn)。在平靜吸氣時(shí),，空氣進(jìn)入狹窄的鼻咽部,，產(chǎn)生渦流。由于小氣道已無軟骨支持,，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后,，管腔通暢性不象軟骨性氣道，易于受胸腔的壓力變化的影響,。小氣道上皮細(xì)胞形成連續(xù)呼吸道內(nèi)層,，作為隔絕外界有害物質(zhì)的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處,，這些細(xì)胞在功能上能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),、產(chǎn)生化學(xué)因子進(jìn)行宿主防御、表達(dá)粘附分子,，并可能通過HLA-DR表達(dá)呈遞抗原,；它們還能產(chǎn)生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病,，如哮喘,、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化，都涉及呼吸道表面上皮細(xì)胞的破壞,；小氣道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴(kuò)增疾病和重塑提供新的治療選擇,。小氣道平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。小氣道的生理功能特點(diǎn)：①小氣道阻力??；②氣流速度慢；③可調(diào)節(jié)控制通氣與血流比例,。小氣管平滑肌細(xì)胞主要功能：①保持氣道張力維持小氣道形態(tài),；②肺小氣道進(jìn)行氣體交換，病變可引起換氣功能障礙,；③炎癥,、痰液阻塞或當(dāng)氣道外壓大于氣道內(nèi)壓時(shí)容易造成小氣道閉合、萎陷,。小氣管平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①支氣管炎,；②肺氣腫；③慢性阻塞性肺疾病,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，含FBS、EGF,、bFGF,、Insulin,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔小氣道平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個(gè)瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存,。
公司產(chǎn)品：
小耳豬肺細(xì)胞;SEP-L1 | 胰島素受體底物-1抗體 |
旁瘤抗原MA1抗體 | 碳酸酶6抗體 |
細(xì)胞外基質(zhì)蛋白FREM1抗體 | 甲基單克隆抗體 |
巨噬細(xì)胞炎性蛋白16抗體 | 尤文氏肉瘤相關(guān)EWS蛋白抗體 |
C2CD3蛋白抗體 | 艾滋病病毒p55抗體 |
PTPN12 Others Human 人 PTPN12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Indonesia/5/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞HPAF | HA Others H10N3 甲型流感 H10N3 (A/mallard/Minnesota/Sg-00194/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
293T(人胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H051人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞培養(yǎng)基100mL 人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞RNAHBdSF miRNA5 μg | HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
CHST3 Others Mouse 小鼠 CHST3 / C6ST-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 3D4/21豬肺泡巨噬細(xì)胞 Porcine alveolar macrophage 3D4/21 1640+10% FBS+0.1mM NEAA+1mM 酸 |
CM-R087大鼠軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔小氣道平滑肌原代細(xì)胞甲基單克隆抗體 |
SiHa細(xì)胞，子細(xì)胞 人鼻咽癌母系細(xì)胞,CNE-2Z細(xì)胞 CL-0240V79(倉鼠肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞HLEC |
CM-H120人元細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | DPEP2 Others Human 人 DPEP2 / MBD-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
KLK4 Others Human 人 KLK-4 / Kallikrein-4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) | 2號(hào)染色體開放閱讀框42抗體 |
酸化富亮重復(fù)激酶2抗體 | MOLT-4細(xì)胞,，急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 髓性甲狀腺癌細(xì)胞,TT細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9403 |
殺菌通透性增加蛋白樣1抗體 | 胞質(zhì)5'核苷酸酶1A抗體 |
酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗體 | PTPN12 Others Human 人 PTPN12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次,，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次,，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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