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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔小腸血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法,、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔小腸血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔小腸血管內(nèi)皮原代細(xì)胞 | 組織來源 | 小腸 |
英文名稱 | Rabbit Small Intestine Vascular Endothelial Cells | 貨號 | YS-01X8452 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自小腸組織,；小腸位于腹中,，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連,，是食物消化吸收的主要場所,。小腸盤曲于腹腔內(nèi)，上連胃幽門,，下接盲腸,，分為十二指腸、空腸和回腸三部分,。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的,，因為食物經(jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運動的機(jī)械性消化后,，基本上完成了消化過程,，同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜,、粘膜下層,、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點是管壁有環(huán)形皺襞,，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層,，形成管狀的腸腺,，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切,；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞,、杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似,，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似,，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短，不形成紋狀緣,。小腸有三種功能即消化,、吸收和分泌及運動功能，其中以吸收和分泌功能為主,。平滑肌細(xì)胞的收縮是負(fù)責(zé)腸蠕動的動力,，促使食物向下運動。血管內(nèi)皮細(xì)胞除了吞噬異物,、細(xì)菌,、壞死和衰老的組織等，還參與集體免疫活動,，包括：①血管收縮及血管舒張,，從而控制血壓；②凝血（血栓形成及纖維蛋白溶解）,；③動脈硬化,；④血管生成；⑤炎癥及腫脹（浮腫）,；⑥內(nèi)皮細(xì)胞亦控制一些物質(zhì),，如白血球進(jìn)出血管。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
小耳豬腎細(xì)胞;SEPfk | 胰島素受體底物-4抗體 |
胰腺特異轉(zhuǎn)錄因子PTF1A抗體 | 致癌基因C-Myc抗體 |
面肩肱型肌營養(yǎng)不良癥相關(guān)蛋白FRG1抗體 | 酸化原活化蛋白激酶MKK7抗體 |
細(xì)胞c氧化酶COX7A2抗體 | 多發(fā)性肌炎/硬皮病自身抗原2抗體 |
2號染色體開放閱讀框27抗體 | 缺氧誘導(dǎo)基因1B蛋白抗體 |
ACVR1 Others Rat 大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | B16-F10(小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人小膠質(zhì)細(xì)胞HM |
人肺動脈成纖維細(xì)胞總RNAHPAF NA | CDH8 Others Rat 大鼠 Cadherin-8 / CDH8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
NRP2 Others Human 人 NRP2 / Neuropilin-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | ALPI Others Human 人 Alkaline Phosphatase / ALPI 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
MuM-2B(人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | CD58 Others Human 人 LFA-3 / CD58 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-R092大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔小腸血管內(nèi)皮原代細(xì)胞酸化原活化蛋白激酶MKK7抗體 |
SDC4 Others Mouse 小鼠 Syndecan-4 / SDC4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | FGF19 Protein Human 重組人 FGF19 蛋白 |
人B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞;RAMOS | hMo-PB single 人類外周血單核細(xì)胞團(tuán)塊單一來源,，超 > 1 mio.cells 人小腦顆粒細(xì)胞RNAHCGC miRNA5 μg |
CaEs-17, 人食管癌細(xì)胞株 癌細(xì)胞,SHZ-88細(xì)胞 SJCRH30 [RC13; RMS 13; SJRH30](人骨髓橫紋肌肉癌細(xì)胞) | 克侖特羅/抗體 |
轉(zhuǎn)錄因子LMCD1抗體 | CLEC6A Others Human 人 CLEC4N / CLEC6A / Dectin-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
嗜乳脂蛋白樣3抗體 | 尼曼匹克C1前體蛋白抗體 |
凝溶膠蛋白抗體 | ACVR1 Others Rat 大鼠 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次,，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min,。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透,。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次,，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上,，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次，每次3min,。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min,，PBS沖洗3次,，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色,。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè),，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察,。
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