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詳細介紹
兔小腸平滑肌原代細胞
兔小腸平滑肌細胞分離自小腸組織,；小腸位于腹中,，上端接幽門與胃相通，下端通過闌門與大腸相連,，是食物消化吸收的主要場所,。小腸盤曲于腹腔內，上連胃幽門,，下接盲腸,，分為十二指腸、空腸和回腸三部分,。小腸內消化是至關重要的,，因為食物經過小腸內胰液,、膽汁和小腸液的化學性消化及小腸運動的機械性消化后，基本上完成了消化過程,，同時營養(yǎng)物質被小腸粘膜吸收了,。小腸管壁由粘膜、粘膜下層,、肌層和漿膜構成,。其結構特點是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛,，絨毛根部的上皮下陷至固有層,，形成管狀的腸腺，其開口位于絨毛根部之間,。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關系密切,；構成腸腺的細胞有柱狀細胞、杯狀細胞,、潘氏細胞和未分化細胞,。柱狀細胞和內分泌細胞與絨毛上皮相似，接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似,，絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短,，不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化,、吸收和分泌及運動功能,，其中以吸收和分泌功能為主。平滑肌細胞的收縮是負責腸蠕動的動力,，促使食物向下運動,。小腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細胞匯合,，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏,；細胞密度低時,，常交織成網狀,；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。小腸平滑肌肉瘤是起源于小腸壁肌層,、黏膜下肌層和腸壁血管平滑肌的惡性腫瘤，是小腸結締組織惡性腫瘤中常見的一種,。因此,，體外小腸平滑肌細胞的培養(yǎng)對研究小腸平滑肌肉瘤提供了基礎和前提。此外,，體外培養(yǎng)細胞，由于影響因素較為單一,，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉導機制的基礎,。
英文名稱 | Rabbit Small Intestine Smooth Muscle Cells | 組織來源 | 小腸 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產品貨號 | YS-01X8131 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 生長特性 | 貼壁 |
產品名稱：兔小腸平滑肌細胞
組織來源：小腸
產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔小腸平滑肌細胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔小腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測
實驗室分離的兔小腸平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
1,、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細胞,，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細胞直接離心收集,，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞,，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
H-4-IL-E 大鼠肝細胞瘤細胞 H-4-IL-E hepatoma cells of rats MEM90%(內2mM Glutamin)+10%胎牛血清,，補加非必須氨基酸(100x) | 谷甘肽合成酶抗體 |
RAS癌基因相關蛋白RAB17抗體 | 細胞表面趨化因子受體9抗體 |
酸化自噬相關蛋白4B抗體 | 25α7羥化酶抗體 |
上皮細胞特異性蛋白1抗體 | 11輕鏈抗體 |
心臟和嵴衍生蛋白1抗體 | 肌球蛋白輕鏈激酶2抗體 |
EGF Protein Mouse 重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 | 大鼠肝內膽管上皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
RT4人膀胱移行細胞瘤細胞 RT4 human ansitional cell bladder papillary tumor cells McCOY's 5+10%FBS | FGF6 Protein Human 重組人 FGF6 / FGF-6 蛋白 |
小鼠間充質干細胞-骨髓MMSC-bm | 小耳豬肺細胞;SEP-L1 |
大鼠肺大動脈平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL | 人間充質干細胞-脂肪裂解物HMSC-ad L |
Sol8細胞,，小鼠骨骼肌肌肉母細胞 人腎上皮細胞,GES細胞 人骨骼肌成肌細胞HSkMM | 兔小腸平滑肌原代細胞25α7羥化酶抗體 |
人前列腺癌細胞;PC-3 [PC3] | BEL-7405(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人真皮成纖維母細胞-新生HDF-n |
GREM1 Others Mouse 小鼠 Gremlin 1 / GREM1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | CM-M018小鼠頜下腺上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
正常小鼠Leydig細胞;TM3 | 原活化蛋白激酶MAP4K4抗體 |
芳香基硫酸酯酶H抗體 | C57BL/6小鼠骨髓間質干細胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cells |
乙酰基轉移酶EID1抗體 | 白介素-5受體α鏈抗體IL-5Rα |
卷曲螺旋結構域蛋白83抗體 | EGF Protein Mouse 重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白 |
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數板計數,。
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