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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔外周血單核采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔外周血單核經(jīng)CD14免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 兔外周血單核原代細(xì)胞 | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Rabbit Peripheral Blood Monocyte Cells | 貨號 | YS-01X8442 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
兔外周血單核細(xì)胞分離自外周血,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞,，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。單核細(xì)胞起源于骨髓中的造血干細(xì)胞,，并在骨髓中發(fā)育。當(dāng)它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細(xì)胞,。與其他血細(xì)胞比較,，單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強的吞噬作用,。單核細(xì)胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中,，細(xì)胞體積繼續(xù)增大，直徑可達(dá)50-80μm,，細(xì)胞內(nèi)所含的溶酶體顆粒和線粒體的數(shù)目也增多,，成為成熟的細(xì)胞。固定在組織中的單核細(xì)胞稱為組織巨噬細(xì)胞,，它們經(jīng)常大量存在于淋巴結(jié),、肺泡壁、骨髓,、肝和脾等器官,。激活了的單核細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞能生成并釋放多種細(xì)胞毒、干擾素和白細(xì)胞介素,，參與機體防衛(wèi)機制,，還產(chǎn)生一些能促進內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞生長的因子。在炎癥周圍單核細(xì)胞能進行細(xì)胞分裂,，并包圍異物,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài)：圓形,、巨噬細(xì)胞樣
傳代特性：不增殖；不傳代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔外周血單核細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1,、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）,，使覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基,；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2,、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻,。
②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或生理鹽水清洗1-2次,，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化,；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱,，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細(xì)胞爬片,，待細(xì)胞長至80%時取出爬片,。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min,，再次用PBS浸洗玻片3次,，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min,，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫）,，PBS沖洗3次，每次3min,。
5. 封閉血清室溫孵育20min,，PBS沖洗3次，每次3min,。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜,，PBS沖洗3次,，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗,，按比例稀釋后滴加在爬片上,，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次,，每次3min,。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,，顯微鏡下觀察,，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化,，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán),。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上,，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干,。
11. 鏡檢觀察,。
公司產(chǎn)品：
KYSE30細(xì)胞，人食管鱗癌 人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,A172細(xì)胞 山羊皮膚細(xì)胞;WGS1 | 谷甘肽S轉(zhuǎn)移酶κ抗體 |
ras癌基因家族Rab5蛋白抗體 | 細(xì)胞表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白4抗體 |
酸化轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體 | 單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白2抗體 |
上皮離子通道蛋白γ抗體 | (II)激活肽1抗體 |
心肌缺血預(yù)處理正調(diào)節(jié)蛋白2抗體 | 肌球蛋白結(jié)合蛋白C抗體 |
CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 | 615小鼠癌瘤株;Ca759 |
L-02細(xì)胞,，正常人肝細(xì)胞 人APP-PS1(M146L)雙基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株,7WML6.0細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA | LLC(小鼠肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
小鼠表皮角化細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL | IL12A & IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 |
CM-R122大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 兔源細(xì)胞 |
P3X63Ag8小鼠骨髓瘤細(xì)胞 Mouse myeloma cell line P3X63Ag8 DMEM培養(yǎng)基+10%FBS | 兔外周血單核原代細(xì)胞單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白2抗體 |
人張氏肝細(xì)胞;Chang liver | EDNRB Others Human 人 EDNRB / Endothelin B Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞 ICPB 7[C-1;ICMP 8639;NCPPB 2626]細(xì)胞 CGM1(EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞) | 小鼠膀胱成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7 | 原活化蛋白激酶13抗體 |
芳基硫酸酯酶A抗體 | HuH-7人肝癌細(xì)胞 Human |
乙?；M蛋白H1b抗體 | 白介素31受體a抗體 |
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體 | CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
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